大鼠對(duì)膳食誘導(dǎo)肥胖和胰島素抵抗的易感性、大豆異黃酮的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、l 膳食誘導(dǎo)肥胖和胰島素抵抗大鼠模型的建立 目的：復(fù)制肥胖與胰島素抵抗模型大鼠，為后續(xù)試驗(yàn)作準(zhǔn)備。 方法：82只SD雄性大鼠按體重隨機(jī)分為基礎(chǔ)飼料組(n=10)和高脂高蔗糖飼料組(n=72)，分別喂飼基礎(chǔ)和高脂高蔗糖飼料，8周后，篩選模型大鼠：①高脂高蔗糖飼料組大鼠空腹體重大于基礎(chǔ)飼料組均數(shù)加1.4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差者入選為肥胖(Ob)模型大鼠；②高脂高蔗糖飼料組大鼠胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)大于基礎(chǔ)飼料組均數(shù)加1.96個(gè)標(biāo)

2、準(zhǔn)差者入選為胰島素抵抗(IR)模型大鼠. 結(jié)果：Ob與IR大鼠模型成功率分別為58.3％、66.7％。 2 大鼠對(duì)膳食誘導(dǎo)肥胖和IR易感性的比較 目的：了解對(duì)高脂高蔗糖膳食誘導(dǎo)肥胖、IR易感性不同大鼠間的差異，并探討其可能機(jī)制。 方法：動(dòng)物造模方法、Ob、lR模型成立的判定方法及基礎(chǔ)飼料對(duì)照組(Bas-C)處理方法同“1”。第一部分高脂高蔗糖飼料喂養(yǎng)大鼠(大豆異黃酮干預(yù)大鼠除外)分為以下4組：非肥胖+

3、非IR組(nOb+nlR，肥胖及IR大鼠篩選后剩余的)、Ob+IR組(Ob+IR，既符合Ob標(biāo)準(zhǔn)又存在IR)、Ob+非lR組(Ob+nlR，符合Ob而不符合IR判定標(biāo)準(zhǔn))、非Ob+IR組(nOb+IR，符合IR、但不符合Ob判定標(biāo)準(zhǔn))。Bas-C繼續(xù)喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料，其余4組在分組后繼續(xù)喂飼高脂高蔗糖飼料。4周后，空腹采集標(biāo)本。檢測(cè)靜脈全血血糖、血清胰島素、C反應(yīng)蛋白(CRP)、腫瘤壞死因予(TNF)-a、白介細(xì)胞介素(1L)-6脂聯(lián)素(a

4、diponeetin，APN)、抵抗素(resistin)、瘦素(1eptin)含量，腎周脂肪脂聯(lián)素、抵抗素、瘦素、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4(GLUT-4)、過(guò)氧化物酶體增生物激活受體-γ(PPAR-γ)、核因子-kB(NF-kB)p65亞基、Bax及Bcl-2等基因mRNA表達(dá)及NF-KB活性。 結(jié)果：①Ob+IR組的體重、內(nèi)臟脂肪含量、HOMA-IR、血清IL-6、TNF-α、CRP、抵抗素(包括腎周脂肪mRNA及循環(huán)血蛋白)、瘦

5、素(腎周脂肪細(xì)胞mRNA)及腎周脂肪NF-KB活性顯著高于nOb+nlR組(P<0.05)，脂聯(lián)素(包括-腎周脂肪mRNA及循環(huán)血蛋白)顯著低于nOb+nlR組(P<0.05)②分組時(shí)，nOb+nIR與nOb+IR兩組體重沒(méi)有明顯差異。4周高脂高蔗糖飼料繼續(xù)干預(yù)后，nOb+IR組體重顯著增加，已不具備肥胖抵抗的特性，趨同于Ob+IR：⑧分組時(shí)，nOb+nIR與Ob+nIR兩組HOMA-IR無(wú)顯著差異，4周高脂高蔗糖飼料繼續(xù)干預(yù)后，Ob+

6、nIR組的HOMA-IR已顯著高于nOb+nlR；④nOb+IR組體重、內(nèi)臟脂肪含量顯著低于Ob+lR組，包括HOMA-IR在內(nèi)的其它指標(biāo)兩組間均無(wú)顯著性差異；⑤nOb+IR組體重、內(nèi)臟脂肪含量顯著低于Ob+nlR組，其它指標(biāo)兩組未見差異；⑥分組時(shí)，Ob+IR與Ob+nlR兩組體重?zé)o顯著差異，HOMA-IR差異顯著，但高脂高蔗糖飼料繼續(xù)干預(yù)4周后，兩組的HOMA-IR和其他指標(biāo)均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，此時(shí)Ob+nlR已趨同于O

7、b+IR；⑦nOb+nIR、Ob+IR、nOb+IR、Ob+nlR四組間，腎周脂肪組織GLUT-4 mRNA水平無(wú)顯著差異；⑧0b+IR、nOb+IR、Ob+nlR組白色脂肪細(xì)胞凋亡率低于nOb+nlR及Bas-C組；⑨nOb+nIR與Bas．C組比較，所有指標(biāo)均無(wú)顯著性差異(P>0-05)。3脂聯(lián)素、抵抗素基因單核苷酸多態(tài)性與膳食誘導(dǎo)Ob和IR易感性的關(guān)系 目的：了解脂聯(lián)素、抵抗素單核苷酸多態(tài)性(SNPs)在膳食誘導(dǎo)大鼠肥胖、

8、胰島素抵抗不同易感性中起的作用。 方法：動(dòng)物造模方法、Ob、IR模型成立的判定方法同“1”。高脂高蔗糖飼料喂養(yǎng)大鼠分為以下4組：Ob組、IR組、肥胖抵抗(Ob-R，體重小于基礎(chǔ)飼料對(duì)照組平均體重+1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差)和抗胰島素抵抗(IR-R，HOMA-IR小于對(duì)照組均數(shù)+1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差)組。檢測(cè)Ob、IR、Ob．R、IR-R四種狀態(tài)大鼠腎周脂肪脂聯(lián)素(C114T，C509T)、抵抗素(C105G)的SNPs，觀察SNPs在四種狀態(tài)大鼠中的分

9、布。 結(jié)果：脂聯(lián)素基因的2個(gè)SNPs位點(diǎn)(Cll4T，C509T)在Ob與Ob-R、瓜與IR-R之間的分布沒(méi)有明顯差異(P>0.05)；抵抗素基因C105G位點(diǎn)SNPs在Ob與Ob-R之間的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但在IR與IR-R間的分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 4 大豆異黃酮對(duì)肥胖和胰島素抵抗大鼠胰島素敏感性的影響及機(jī)制研究 目的：觀察大豆異黃酮(SIF)對(duì)高脂高蔗糖膳食誘導(dǎo)肥胖(Ob)、胰島素抵抗(IR)大鼠

10、胰島素敏感性(IS)的影響及作用機(jī)制。 方法：42只Ob模型大鼠(依據(jù)體重大小)和48只lR模型大鼠(依據(jù)HOMA-IR大小)分別隨機(jī)分為：對(duì)照組(C，無(wú)菌水)、SIF干預(yù)的低(SIFL，50 mg·kg<'-1>·d<'-1>)、中(SIFM，150 mg·k<'-1>·d<'-1>)、高(SIFH，450mg·k<'-1>·d<'-1>)劑量組。分組后，Ob和IR 模型大鼠均繼續(xù)喂飼高脂高蔗糖飼料，灌胃相應(yīng)受試物4周。期間觀

11、察大鼠一般狀況、攝食量、體重。結(jié)束時(shí)，股動(dòng)脈取血處死大鼠，采集空腹?fàn)顟B(tài)標(biāo)本。檢測(cè)指標(biāo)同“2”。 結(jié)果：SIF干預(yù)的4周內(nèi)，各大鼠未見明顯異常。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，SIF高劑量組體重、內(nèi)臟脂肪含量、HOMA-IR均較相應(yīng)的Ob、IR對(duì)照組顯著降低(P<0.05或P<0.01)。SIF高劑量能顯著降低IR大鼠血清IL-6含量(P<0.05)，三個(gè)SIF劑量組雖有降低Ob大鼠血清IL-6含量的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；SlF中、高

12、劑量能降低Ob大鼠、SIF三個(gè)劑量能降低IR大鼠的血清TNF-α含量(P<0.05或P<0.01)；Ob、IR大鼠各SIF劑量組的CRP含量與相應(yīng)對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；SIF中、高劑量能顯著提高Ob、IR大鼠腎周脂肪脂聯(lián)素mRNA表達(dá)及血清含量(P<0.05或P<0.01)；SIF高劑量能顯著降低Ob、IR大鼠腎周脂肪抵抗素mRNA表達(dá)及血清含量(P<0.05或P<0.01)；SIF高劑量能顯著降低瘦素腎周脂肪mRN

13、A表達(dá)，升高血清瘦素水平；Ob大鼠SIF高劑量及IR大鼠SIF中、高劑量可以顯著提高腎周脂肪細(xì)胞GLUT-4及PPAR-γ mRNA表達(dá)(P<0.05或P<0.01)；Ob大鼠SIF三個(gè)劑量組及IR大鼠高劑量組可顯著降低腎周脂肪NF-KB p65 mRNA的表達(dá)(P<0.05或P<0.01)，lR大鼠SIF高劑量組可顯著降低NF-KB的活性(P<0.05)，其它SIF干預(yù)組NF-KB的活性雖未達(dá)到顯著性差別，但均有不同程度降低；SIF三

14、個(gè)劑量對(duì)Ob、IR大鼠腎周脂肪Bax與Bcl-2基因mRNA比值均無(wú)明顯影響(P>0.05)。內(nèi)臟脂肪含量、血清CRP、TNF-α、IL-6、抵抗素、腎周脂肪NF-kB活性與HOMA-IR呈顯著的正相關(guān)，即與Is呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)；血清脂聯(lián)素、瘦素含量及腎周脂肪PPAR-γmRNA水平與HOMA-IR呈顯著負(fù)相關(guān)，即與IS呈正相關(guān)(P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論：①高脂高蔗糖飼料喂養(yǎng)大鼠8周，成功建立了Ob及IR模型

15、，其造模成功率分別為58.3％和66.7％。延長(zhǎng)高脂高蔗糖飼料干預(yù)時(shí)間，可提高Ob與IR的成模率。②在Ob與瓜之間可能存在共同的病理基礎(chǔ)，使兩者相互促進(jìn)，形成惡性循環(huán)。③對(duì)膳食誘導(dǎo)Ob與IR具有不同易感性大鼠間，在低度炎癥介質(zhì)、脂肪細(xì)胞因子等方面存在差異，其機(jī)制可能與抵抗素基因C105G位點(diǎn)的SNPs有關(guān)、與脂聯(lián)素C114T及C509T位點(diǎn)的SNPs無(wú)關(guān)。④大豆異黃酮具有提高膳食誘導(dǎo)的Ob和IR模型大鼠胰島素敏感性的作用。其機(jī)制至少部分