三氧化二砷聯(lián)合塞萊昔布對(duì)HCCLM-,3-肝癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、第一部分三氧化二砷、塞萊昔布對(duì)HCCLM3肝癌細(xì)胞的作用 目的：探討三氧化二砷、塞萊昔布對(duì)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、粘附、運(yùn)動(dòng)、侵襲及其復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)的影響。 方法：采用MTT法測(cè)定三氧化二砷、塞萊昔布對(duì)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、粘附能力的影響；利用Transwell小室法了解三氧化二砷、塞萊昔布對(duì)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、侵襲能力的作用；運(yùn)用細(xì)胞爬片免疫組化方法了解三氧化二砷、塞萊昔布對(duì)HCC

2、LM<,3>肝癌細(xì)胞MMP-2、VEGF、CD44V6和E-cadherin表達(dá)的影響。 結(jié)果：三氧化二砷、塞萊昔布呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性抑制HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，在低濃度時(shí)兩者即有協(xié)同作用。4.0μmol/l三氧化二砷、80μmol.l塞萊昔布單用及合用48h對(duì)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞的粘附、運(yùn)動(dòng)、侵襲能力均有抑制作用，作用強(qiáng)度：聯(lián)合組>As<,2>O<,3>組>Celecoxib組>對(duì)照組。4.0μmol/l三氧化

3、二砷、80μmol/l塞萊昔布單用及合用48h均能下調(diào)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞MMP-2表達(dá)，但主要是As<,2>O<,3>在起作用；4.0μmol/l三氧化二砷、80μmol/l塞萊昔布單用及合用48h均能下調(diào)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞中VEGF的表達(dá)，但以聯(lián)合組作用最強(qiáng)，As<,2>O<,3>、Celecoxib作用相似；4.0μmol/l三氧化二砷、80μmol/l塞萊昔布單用及合用48h均能上調(diào)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞E-c

4、adherin、下調(diào)CD44V6的表達(dá)，作用強(qiáng)度：聯(lián)合組>Celecoxib組>As<,2>O<,3>組>對(duì)照組。 結(jié)論：三氧化二砷、塞萊昔布能抑制HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、粘附、運(yùn)動(dòng)和侵襲能力，其作用機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)，兩者間有協(xié)同作用。 第二部分三氧化二砷聯(lián)合塞萊昔布對(duì)裸鼠HCCLM3肝癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的影響 目的：探討三氧化二砷、塞萊昔布對(duì)裸鼠HCCLM<,3>肝癌切除術(shù)后復(fù)

5、發(fā)、轉(zhuǎn)移及其相關(guān)基因表達(dá)的影響。 方法：建立間接原位移植HCCLM<,3>肝癌裸鼠模型和模擬人肝癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移裸鼠模型。給予三氧化二砷、塞萊昔布藥物治療；觀(guān)測(cè)裸鼠一般情況；術(shù)后33天處死裸鼠，測(cè)量肝臟復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌體積、數(shù)量；計(jì)數(shù)肺微轉(zhuǎn)移灶；采血檢測(cè)肝、腎功能；采用免疫組化方法了解三氧化二砷、塞萊昔布對(duì)肝臟復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌組織中MMP-2、VEGF、CD44V6和E-cadherin表達(dá)的影響；采用實(shí)

6、時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)肝臟復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌組織中VEGF的表達(dá)。 結(jié)果：各實(shí)驗(yàn)組肝臟HCCLM<,3>肝癌復(fù)發(fā)情況：對(duì)照組(6/6)，塞萊昔布組(8/8)，三氧化二砷組(5/8)，聯(lián)合組(3/8)。各實(shí)驗(yàn)組復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌體積(mm<'3>)：對(duì)照組(1917.00±647.55)，塞萊昔布組(387.69±202.39)，三氧化二砷組(61.63±107.30)，聯(lián)合組(4.69±7.24)。各實(shí)驗(yàn)組HCCL

7、M<,3>肝癌肝內(nèi)轉(zhuǎn)移情況：對(duì)照組(5/6)，塞萊昔布組(2/8)，三氧化二砷組(1/8)，聯(lián)合組(0/8)。各實(shí)驗(yàn)組HCCLM<,3>肝癌肺微轉(zhuǎn)移灶(個(gè))：對(duì)照組(5.50±1.05)，塞萊昔布組(1.63±1.60)，三氧化二砷組(0.88±1.25)，聯(lián)合組(0.25±0.71)。各實(shí)驗(yàn)組裸鼠體重、肝、腎功能測(cè)定無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三氧化二砷、塞萊昔布能下調(diào)HCCLM<,3>肝癌組織中MMP-2、VEGF，上調(diào)E-cadherin的表達(dá)

8、，且兩者作用相似，聯(lián)合應(yīng)用作用最強(qiáng)；As<,2>O<,3>、Celecoxib能下調(diào)HCCLM<,3>肝癌組織中CD44V6的表達(dá)，作用強(qiáng)度：聯(lián)合組>As<,2>O<,3>組>Celecoxib組>對(duì)照組。 結(jié)論：三氧化二砷、塞萊昔布能減小肝臟復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌體積和數(shù)量，聯(lián)合使用有相加效應(yīng)；三氧化二砷、塞萊昔布能減少HCCLM<,3>肝癌的肺轉(zhuǎn)移，聯(lián)合使用有相加效應(yīng)。三氧化二砷、塞萊昔布對(duì)各組裸鼠的體重、肝、腎功能無(wú)明

9、顯影響。三氧化二砷、塞萊昔布抑制HCCLM<,3>肝癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。兩種藥物有協(xié)同作用。 第三部分對(duì)三氧化二砷、塞萊昔布協(xié)同機(jī)制的探討材料與方法 目的：探討三氧化二砷、塞萊昔布抑制HCCLM<,3>肝癌的協(xié)同機(jī)制。 方法：流式細(xì)胞儀檢測(cè)三氧化二砷、塞萊昔布對(duì)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞周期和凋亡的影響。細(xì)胞爬片免疫組化方法了解三氧化二砷、塞萊昔布對(duì)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞CO

10、X-2和NF-kBp65表達(dá)的影響。免疫組化方法檢測(cè)裸鼠肝臟復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌組織中COX-2和NF-kBp65的表達(dá)。 結(jié)果：4．0μmol/l三氧化二砷、80μmol/l塞萊昔布單用及合用48h均能干擾HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞周期，將其阻滯于G<,0>/G<,1>期；三氧化二砷、塞萊昔布均能增加HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞的凋亡，而且聯(lián)合組凋亡率大于單用組之和。體外實(shí)驗(yàn)：4．0μmol/l三氧化二砷上調(diào)HCCLM<,

11、3>肝癌細(xì)胞NF-kBp65和COX-2表達(dá)，80μmol/l塞萊昔布下調(diào)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞COX-2表達(dá)，對(duì)NF-kBp65表達(dá)無(wú)明顯影響，聯(lián)合應(yīng)用塞萊昔布能明顯降低三氧化二砷上調(diào)NF-kBp65引起的COX-2表達(dá)增加。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：三氧化二砷下調(diào)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞NF-kBp65和COX-2表達(dá)，塞萊昔布下調(diào)HCCLM<,3>肝癌細(xì)胞COX-2表達(dá)，對(duì)NF-kBp65表達(dá)無(wú)明顯影響，三氧化二砷、塞萊昔布聯(lián)合應(yīng)用顯著下調(diào)