免疫調(diào)控和內(nèi)皮細胞損傷與重度子癇前期的相關性研究.pdf

1、目的：妊娠期高血壓疾?。╤ypertensive disorders complicating pregnancy）是妊娠期特有的疾病，是導致孕產(chǎn)婦和圍生兒病率及死亡率增加的常見原因之一。子癇前期（preeclampsia，PE)是妊娠期高血壓疾病分類中非常重要的一種，尤其是重度子癇前期（severe preeclampsia, sPE )對母兒危害嚴重，可以導致多器官功能損害。其病因和發(fā)病機制至今尚未完全闡明。免疫適應不良學說(imm

2、une maladaptation hypothesis)和血管內(nèi)皮損傷學說是國際上較為公認的兩個學說。本研究包括：1）從免疫調(diào)控的角度探討輔助性T細胞（Th）亞群Th1型細胞因子白介素-2（IL-2）、干擾素-γ（IFN-γ）和Th2型細胞因子白介素-10（IL-10）在重度子癇前期發(fā)病中的意義；2）探討對胎盤滋養(yǎng)細胞浸潤有調(diào)節(jié)能力和免疫抑制中起重要作用的細胞因子轉化生長因子-β1（TGF-β1）在sPE發(fā)病中所起的作用，并且應用變性

3、高效液相色譜儀（DHPLC）和基因測序研究TGF-β1第一號外顯子+869 位點T/C和+915 位點G/C的基因多態(tài)性與TGF-β1的產(chǎn)量和sPE發(fā)病的關系。3）從內(nèi)皮細胞損傷的角度探討血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）和血管內(nèi)皮收縮因子內(nèi)皮素（ET）在sPE發(fā)病中的作用，并研究它們與免疫細胞因子的相關性。4）研究漢族和少數(shù)民族子癇前期發(fā)病的不同臨床特點和妊娠轉歸。
　　 方法：
　　 1）第一部分按照重度子癇前期的納入標準選取

4、在新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院產(chǎn)科入院的44例患者作為病例組，同時隨機選取同期入院的35例血壓正常的妊娠產(chǎn)婦作為對照組，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA法，Enzyme linked immunosorbent assay）測定血漿中IL-2、IFN-γ、IL-10的濃度。同時計算Th1/Th2（IL-2/IL-10和IFN-γ/IL-10）比值。
　　 2）第二部分取第一部分的44例重度子癇前期患者作為病例組，同時隨機

5、選取同期入院的61例血壓正常的妊娠產(chǎn)婦作為對照組，采用變性高效液相色譜（DHPLC）技術和基因測序技術分析TGF-β1第一號外顯子+869 位點T/C（密碼子10）和+915 位點G/C（密碼子25）的基因多態(tài)性，同時采用ELISA法測定44例sPE患者和61例對照組中35例正常妊娠婦女的血漿中TGF-β1水平，病例組及對照組與第一部分為同一群體。
　　 3）第三部分與第一部分為同一群體，采用放射免疫法測定血漿中內(nèi)皮素（ET）和

6、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）的水平，分析ET和AngⅡ與IL-2、IFN-γ、IL-10、TGF-β1、IL-2/IL-10比值、IFN-γ/IL-10比值等各細胞因子之間的相關性。
　　 4）第四部分通過對我院2003-2007年間收治的295例子癇前期患者進行回顧性分析，按照民族不同將患者分為漢族和少數(shù)民族，再按照子癇前期患者發(fā)病時間不同分為早發(fā)型和晚發(fā)型，共分為漢族早發(fā)型、漢族晚發(fā)型、少數(shù)民族早發(fā)型、少數(shù)民族晚發(fā)型四組，分析漢

7、族和少數(shù)民族子癇前期患者的發(fā)病率，比較四組患者嚴重并發(fā)癥的發(fā)生情況、胎（嬰）兒死亡率比較、臨床檢測指標比較，分析子癇前期患者各指標與圍產(chǎn)結局的相關性。
　　 結果：
　　 1）與正常妊娠婦女比較，重度子癇前期患者的血漿IL-2水平顯著增高（28.38±5.07 VS 35.26±5.97，t=5.43，P＜0.001），而血漿IL-10水平顯著降低（109.87±34.66 VS 81.15±27.02，t=4.14，P

8、＜0.001），血漿IFN-γ水平?jīng)]有顯著差異（42.13±6.36 VS 42.35±4.83，t=0.175，P＞0.05）；sPE患者血漿中IL-2/IL-10比值和血漿IFN-γ/IL-10比值均顯著高于血壓正常的妊娠婦女（分別為0.474±0.149 VS 0.299±0.115，t=5.703，P＜0.001和0.530±0.178 VS 0.428±0.142, t=2.77，P＜0.01）。
　　 2）sPE患者

9、血漿中的TGF-β1的水平是597.01±99.95 pg/ml，而正常對照組孕婦血漿中TGF-β1的水平是543.07±60.92pg/ml，兩組相比，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.95，P＜0.01）。sPE患者TGF-β1第一號外顯子+869位點的基因型TT型、TC型、CC型的基因型頻率分別為29.5%、56.8%、13.7%，對照組婦女的相應位點的基因型頻率分別為37.7%、57.4%、4.9%，兩組TT型與TC+CC型基因型頻率進

10、行比較，結果顯示差異沒有統(tǒng)計學意義（=0.755, p=0.385, P＞0.05），sPE孕婦+869位點T等位基因頻率為42%，C等位基因頻率為58%; 對照組孕婦T等位基因頻率為33.6%，C等位基因頻率為66.4%，對兩組等位基因頻率進行比較，結果顯示差異沒有統(tǒng)計學意義（=1.559，P=0.212，P＞0.05）。sPE患者TGF-β1第一號外顯子+915位點的基因型GG型、GC型、CC型的基因型頻率分別為77.3%、13.6

11、%、9.1%，對照組婦女的相應位點的基因型頻率分別為88.5%、6.6%、4.9%，兩組GG型與GC型+CC型基因型頻率進行比較，結果顯示差異沒有統(tǒng)計學意義（=2.385, p=0.123，P＞0.05）。sPE孕婦+915位點G等位基因頻率為84.1%，C為15.9%; 對照組孕婦等位基因頻率G為91.8%，C為8.2%，對兩組等位基因頻率進行比較，結果顯示差異沒有統(tǒng)計學意義（=3.004，P=0.083，P＞0.05）。sPE組和對

12、照組孕婦TGF-β1+869位點TC+CC型與TT型之間血漿TGF-β1水平比較差異均沒有統(tǒng)計學意義（t=0.621，P=0.538, P＞0.05和t=-1.883，P=0.069, P＞0.05）; sPE組和對照組孕婦TGF-β1+915位點GC+CC型與GG型之間血漿TGF-β1水平比較差異沒有統(tǒng)計學意義（t=-0.617，P=0.541, P＞0.05和t=-0.607，P=0.548, P＞0.05）。
　　 3）s

13、PE患者的血漿ET水平比正常妊娠婦女顯著增高（98.24±45.04 pg/ml VS 68.90±14.36 pg/ml，t'=4.069，P＜0.01）；sPE患者的血漿AngⅡ水平與正常妊娠婦女相比差異沒有統(tǒng)計學意義（54.69±23.69 pg/ml VS 59.34±13.84 pg/ml，t'=1.089，P＞0.05）。相關性分析顯示重度子癇前期組的血漿ET水平與血漿中的細胞因子IL-2水平、IL-2/IL-10比值、IF

14、N-γ/IL-10比值的相關性有顯著的統(tǒng)計學意義，Pearson相關系數(shù)分別為0.494、0.465、0.444。重度子癇前期組的血漿AngⅡ水平與血漿中的細胞因子IL-2水平相關性有顯著的統(tǒng)計學意義（P＜0.01），Pearson相關系數(shù)為0.499。重度子癇前期組的血漿IL-10水平與血漿中的細胞因子IFN-γ水平相關性有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），Pearson相關系數(shù)r為0.425。
　　 4）漢族和少數(shù)民族子癇前期的發(fā)

15、病率相比較，差異有統(tǒng)計學意義（2.81% VS 3.66%，=3.98，P＜0.05 ），漢族和少數(shù)民族早發(fā)型子癇前期的發(fā)病率相比較，差異有統(tǒng)計學意義（0.92% VS 2.01%，=16.50，P＜0.01），少數(shù)民族子癇前期發(fā)病率尤其是早發(fā)型顯著高于漢族。漢族早發(fā)型組與少數(shù)民族早發(fā)型組的嚴重并發(fā)癥的發(fā)生率沒有明顯差異（90.4% VS 90%，校正=0.07，P＞0.05），但少數(shù)民族晚發(fā)型型組的嚴重并發(fā)癥的發(fā)生率顯著高于漢族晚發(fā)型

16、組的嚴重并發(fā)癥的發(fā)生率（分別為30.3% VS 14.09%，=5.02，P＜0.05）；漢族和少數(shù)民族早發(fā)型組的胎（嬰）兒死亡率均顯著高于晚發(fā)型組（14.63%和22.5% VS 5.77%和3.03%，=5.25，P＜0.05和校正=4.27，P＜0.05）。漢族和少數(shù)民族子癇前期患者的臨床檢測指標相比較，少數(shù)民族患者的白細胞計數(shù)比漢族患者顯著增高（12.74±5.03 VS 9.83±3.05，P＜0.001）。少數(shù)民族的血紅蛋白

17、值顯著低于漢族組（109.52±20.94 VS 116.46±19.03，P＜0.01）。少數(shù)民族組的血漿總蛋白、白蛋白顯著低于漢族組（分別為55.43±9.65 VS 49.70±7.23，P＜0.001；25.88±7.21 VS 20.94±5.75，P＜0.001）。兩組的尿素氮和肌酐相比較，差異有統(tǒng)計學意義（5.84±3.50 VS 3.98±1.44，P＜0.001；86.48±59.46 VS 64.24±17.48，P

18、＜0.01）。用Logistic法對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)分娩孕周、舒張壓水平、血漿白蛋白水平、胎（嬰）兒出生體重這四項指標具有統(tǒng)計學意義，與圍產(chǎn)兒的結局有相關性。
　　 結論：
　　 1）重度子癇前期的發(fā)生與Th1/Th2免疫失衡有關，免疫應答向Th1型偏移，Th1型細胞因子IL-2水平增高和Th2型細胞因子IL-10水平的降低與重度子癇前期的發(fā)病機理相關，血漿IL-2/IL-10比值和IFN-γ/IL-10比值的顯著

19、增高提示免疫應答激活和免疫耐受不足共同參與了重度子癇前期的發(fā)生和發(fā)展。
　　 2）血漿中TGF-β1水平的增高可能與重度子癇前期的病理生理學變化有關，TGF-β1的第一號外顯子+869 位點T/C和+915 位點G/C的基因多態(tài)性與重度子癇前期的發(fā)生沒有相關性，相應的等位基因不是重度子癇前期的易感基因。這兩個位點與TGF-β1的產(chǎn)量也未見明顯的相關性。提示在子癇前期的發(fā)生中TGF-β1的變化可能與其他基因位點的多態(tài)性有關，+86

20、9 位點和+915 位點的基因多態(tài)性可能和重度子癇前期的發(fā)生無關。
　　 3）血漿中血管內(nèi)皮收縮因子ET水平增高與重度子癇前期的發(fā)生有關，與血漿中細胞因子IL-2水平、IL-2/IL-10比值、IFN-γ/IL-10比值有相關性，而且呈正相關；盡管血漿中AngⅡ水平在重度子癇前期患者中沒有顯著變化，但是其與IL-2水平有相關性，且呈正相關，提示其在重度子癇前期的發(fā)病中可能通過細胞因子網(wǎng)絡的調(diào)節(jié)發(fā)揮作用。
　　 4）少數(shù)民