神經(jīng)干細(xì)胞紋狀體內(nèi)移植后的行為和功能研究.pdf

1、本文研究目的：研究神經(jīng)干細(xì)胞移植到成年大鼠紋狀體后，在宿主腦內(nèi)的存活、遷移、分化等行為，為腦內(nèi)細(xì)胞移植提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證據(jù)；探討神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)PD模型動(dòng)物的治療改善情況。 研究方法：實(shí)驗(yàn)從E14胎鼠腦室下帶區(qū)(subventricularzone，SVZ)分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞。采用神經(jīng)球培養(yǎng)方法，獲得大量的細(xì)胞克隆。分別用抗Nestin抗體、抗NF抗體、抗GFAP抗體和抗CNP抗體，對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行干細(xì)胞特性和多分化潛能的免疫組織化

2、學(xué)鑒定。 原代培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)3次傳代培養(yǎng)之后，選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的神經(jīng)干細(xì)胞用AAV2-GFP感染標(biāo)記，把帶有GFP標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞移植到成年大鼠紋狀體中。于細(xì)胞移植后的45天、90天和120天時(shí)分別灌流固定實(shí)驗(yàn)大鼠，對(duì)固定后的大腦進(jìn)行矢狀冰凍切片，熒光顯微鏡下觀察并配合免疫組織化學(xué)方法，研究移植細(xì)胞在大鼠腦內(nèi)的存活、遷移、分化等行為。 向健康成年大鼠的前腦內(nèi)側(cè)束部位注射適量6-羥多巴胺(6-OHDA)，建立帕金森病的

3、大鼠模型，一個(gè)月后，用阿撲嗎啡誘導(dǎo)模型大鼠旋轉(zhuǎn)，符合行為學(xué)要求的視為PD模型建立。對(duì)成功建立帕金森病模型的大鼠，向其腦內(nèi)紋狀體部位進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞移植，研究神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)PD模型大鼠的治療改善情況。 研究結(jié)果： (1)從E14胎鼠的SVZ部位分離得到的細(xì)胞具有增殖和形成神經(jīng)球的能力，神經(jīng)球表達(dá)Nestin，神經(jīng)球分化后的細(xì)胞分別對(duì)NF、GFAP、CNP具有免疫陽(yáng)性反應(yīng)。 (2)AAV2-GFP感染標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞

4、在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)綠色熒光，分化后的GFP標(biāo)記細(xì)胞從胞體到突起整個(gè)細(xì)胞都有綠色熒光標(biāo)記。 (3)在神經(jīng)干細(xì)胞移植后的各時(shí)間點(diǎn)，宿主腦內(nèi)都有大量標(biāo)記細(xì)胞存在。 (4)神經(jīng)干細(xì)胞移植后45天，細(xì)胞遷移表現(xiàn)出明顯的方向性。神經(jīng)干細(xì)胞移植后90天，多數(shù)細(xì)胞表現(xiàn)為朝向腹后側(cè)遷移，遷移出的最遠(yuǎn)距離為1.0mm。神經(jīng)干細(xì)胞移植后120天，遷移的細(xì)胞主要表現(xiàn)為兩條遷移路線：一條細(xì)胞沿弧形路線向背后側(cè)遷移到達(dá)胼胝體下緣；另一條細(xì)胞向腹后側(cè)

5、遷移到達(dá)黑質(zhì)，并有細(xì)胞繞過(guò)或穿過(guò)黑質(zhì)。 (5)遷移進(jìn)入一定腦區(qū)的神經(jīng)干細(xì)胞分化后具有βtubulinⅢ免疫陽(yáng)性反應(yīng)。 (6)6-羥基多巴胺注入大鼠前腦內(nèi)側(cè)束后一個(gè)月，能夠成功建立起帕金森病動(dòng)物模型。 (7)神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)帕金森病模型動(dòng)物的行為有一定程度的改善。 研究結(jié)論： (1)E14胎鼠SVZ來(lái)源的神經(jīng)細(xì)胞具有增殖和自我更新能力，具有多向分化潛能，符合神經(jīng)干細(xì)胞的基本特性。 (2)AA