免疫PCR檢測抗p53蛋白抗體在乳腺癌診斷中的應用.pdf

1、摘 要本研究 建立了 血清抗 P 5 3蛋白 抗體免疫聚合酶 鏈反 應 ( I m m u n o - p o l y m e r a s ec h a i n r e a c t i o n ， 免疫P C R ) 檢測方法， 探討了 乳腺癌患者血清中 抗P 5 3 蛋白 抗體與組織中P 5 3 蛋白 表達之間的關系及臨床意義，旨 在為臨床乳腺癌 P 5 3 蛋白 檢測提供實用的替代工具。我們以 聚乙 烯亞胺 ( P E I ) 為

2、化學交聯(lián)劑， 使S a H I g G和P N C 3 D N A發(fā)生化學連接， 構 建了S a H I g G - D N A探針， 經(jīng)D N A和抗I g G 活性鑒定， 質(zhì)量合格。 本實驗 構建 的S a H I g G - D N A 探 針中S a H I g G 屬 于二 抗， 因 此 在免 疫P C R 技 術中 具 有 廣泛應用價值。用免疫 P C R方法檢測 8 6份乳腺癌患者血清抗 P 5 3蛋白 抗體的陽性率為3

3、9 . 5 % , 4 0 份非癌患者和 1 2 0 份正常人血清抗 P 5 3 蛋白 抗體均為陰性， 乳腺癌患者血清抗 P 5 3 蛋白 抗體檢出 率明 顯高于非癌患者和正常人 ( P0 . 0 5 ) ， 因此， 免疫P C R方法檢測血清抗P 5 3 蛋白 抗體特異性為 1 0 0 %，可以作為乳腺癌血清學診斷指標。采用免疫組 化( I n u n u n o h i s t o c h e m i s t r y , I H

4、 C ) 方法測定組織中的P 5 3 蛋白 表達狀況， 5 3 份P 5 3 蛋白陽性患者血清抗P 5 3 蛋白 抗體陽性率為6 4 . 2 % , 顯著高于P 5 3蛋白陰 性對照組( 0 % ) ， 血清抗 P 5 3蛋白 抗體測定與 P 5 3蛋白 表達密切相關( P < 0 . 0 1 )。E L I S A方法檢測血清抗P 5 3 蛋白 抗體的陽性率為 1 8 . 6 % ， 免疫P C R方法對抗P 5 3 蛋白 抗體

5、的 檢出 率 ( 3 9 . 5 % ) 明 顯高 于E L I S A方法( P < 0 . 0 1 ) ， 因 此免疫P C R方法檢測乳腺癌患者血清抗P 5 3 蛋白 抗體的 敏感性明 顯高于E L I S A方法。免疫P C R方 法檢測血 清抗p 5 3 蛋白 抗 體與 傳統(tǒng)的 免疫 組化染 色法相比 較， 取材更 方便， 創(chuàng)傷性小 且 檢測方 法簡 便易行， 因 此檢 測血清抗P 5 3 蛋白 抗體是 檢測組織P 5

6、3 蛋白 理想的替代工具。[ 關鍵 詞 ] 免疫P C R 抗P 5 3 蛋白 抗 體 E L I S A方 法 乳腺癌第 1 頁 共 5 6 頁縮略語縮寫 英文全名 中文全名S a H I g G s h e e p a n t i - h u m a n I g G 羊抗人免疫球蛋白GP CR p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n 聚合酶鏈反應I P CR i m m u

7、 n o - p o l y m e r a s e c h a i n 免疫 P C RE L I S A e n z y m e l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 測 定I H C i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y 免疫組織化學D A B d i a m i n o b e n z i d i

8、n e 二氨基聯(lián)苯胺s t r e p t a v i d i n - P e r o x i d a s eO - p h e n y l e n e d i a m i n e鏈霉親合素一 過氧化物酶令 a 苯二胺E t h i d i u m b r o mi d a 澳化乙錠P h o s p h a t e - b u f f e r e d s a l i n e 磷酸鹽緩沖鹽水D S s P o P E B P B第