病理性疼痛對(duì)老齡雄性大鼠海馬細(xì)胞凋亡和CHAT的影響.pdf

1、目的：通過(guò)老齡雄性大鼠病理性疼痛模型研究病理性疼痛對(duì)海馬細(xì)胞凋亡和膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(CHAT)的影響。
　　 方法：選用18-20個(gè)月齡的SD大鼠(450-500g)72只隨機(jī)分為6組,N=12。樣本量根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)估算得出。A組:正常對(duì)照組；B組:假手術(shù)組；C組:CCI模型組；D組:CCI后止痛組；E組:單純麻醉組；F:單純止痛組。建立模型前均采用10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉后,局部消毒,A組不予處理,僅作對(duì)照；B組左側(cè)大

2、腿中部切開,僅暴露坐骨神經(jīng)但不結(jié)扎隨即縫合。C組大鼠左側(cè)大腿中部切開,暴露坐骨神經(jīng)在其分叉處用4-0絲線間隔1mm松扎4道,逐層縫合；D組CCI造模后,給予每24小時(shí)皮下注射2 mg/kg酮基布洛芬(Ketoprofen)止痛處理,用于觀察是否良好的止痛可以減輕認(rèn)知功能障礙的發(fā)生；E組僅用10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉,不予手術(shù)處理,用以排除麻醉對(duì)大鼠認(rèn)知的影響；F組不予任何手術(shù)處理,單純給予酮基布洛芬止痛處理,用于對(duì)照觀察是否

3、止痛藥影響大鼠認(rèn)知功能,以便通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法排除此干擾因素。各組動(dòng)物按前述預(yù)定方案造模,造模之后1、7、14天,每天每組動(dòng)物各取4只,用生理鹽水100ml和含多聚甲醛的PBS灌注液灌注300ml后斷頭處死,取出完整大腦組織,剝離海馬,分別進(jìn)行海馬組織的HE染色、流式細(xì)胞儀和TUNEL試劑盒檢測(cè)海馬細(xì)胞的凋亡以及免疫組化分析檢測(cè)大鼠海馬組織膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶的活性。
　　 結(jié)果：1,行為學(xué)方面,A組干預(yù)前后沒有變化:B組、C組、D組,手

4、術(shù)干預(yù)后,大鼠表現(xiàn)為術(shù)側(cè)足跛行,易受驚,活動(dòng)度降低,反應(yīng)力明顯弱于A組；E組給予單純麻醉清醒后無(wú)異常,和A組相比無(wú)差異；F組給予單純止痛后,無(wú)不良反應(yīng),但給予刺激之后的反應(yīng)度稍弱于A組,明顯強(qiáng)于其他組。2,大鼠海馬細(xì)胞凋亡的測(cè)定:各組大鼠中,海馬細(xì)胞凋亡最嚴(yán)重的是C組,和其它各組相比差異顯著P<0.05,其次為B組和D組,A組、E組、F組凋亡程度最輕,并且后三組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3,鏡下大鼠海馬膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(CHAT)的測(cè)定:40

5、0倍鏡下計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),A組、E組和F組相互比較無(wú)明顯差別,P>0.05,和A組正常對(duì)照組相比,400倍鏡下B、C、D組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少,P<0.05,其中C組最少,說(shuō)明C組膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(CHAT)含量最低。
　　 結(jié)論：病理性疼痛是一種強(qiáng)烈的應(yīng)激刺激,對(duì)大鼠的認(rèn)知功能有明顯的影響,大鼠在造模后的反應(yīng)明顯差于手術(shù)前,微觀上表現(xiàn)為海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶含量顯著降低,膽堿能系統(tǒng)受到極大削弱,從而相互驗(yàn)證:病理性疼痛