MSCs誘導(dǎo)體外分化來的Naive T細(xì)胞免疫耐受的實驗研究.pdf

1、目的意義:GVHD是同種異體造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)后影響預(yù)后的重要并發(fā)癥.受者預(yù)處理造成組織損傷并釋放炎性因子(如IFN-γ、IL-2等)引起GVHD.最近的研究發(fā)現(xiàn)骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)不僅可以分化為多種間充質(zhì)組織,而且具有支持造血和免疫調(diào)節(jié)作用,但其機(jī)制尚不清楚.目前的研究認(rèn)為供者來源的Naive T細(xì)胞識別受者主要組織相容性抗原啟動了GVHD.我們將體外新生的Naive T細(xì)胞接種于異基因MSCs上,觀察

2、MSCs對Naive T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響,直接研究它對Naive T細(xì)胞的作用,將更深入地揭示其預(yù)防GVHD的機(jī)制.材料和方法:1、MSCs體外分離培養(yǎng):將肝素抗凝的骨髓用密度梯度離心法(過percoll細(xì)胞分離液)分離出單個核細(xì)胞,體外培養(yǎng)貼壁細(xì)胞,傳3代后得到純度和數(shù)量均較高的MSCs,經(jīng)60Co照射后作為實驗細(xì)胞.2、臍血CD34+細(xì)胞體外分化為Naive T細(xì)胞:將胎兒胸腺組織貼壁培養(yǎng)建立胸腺基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)(TSC)體系;用

3、單克隆抗體-磁珠分離系統(tǒng)分離純化臍血CD34+細(xì)胞;將CD34+細(xì)胞植入TSC并添加IL-12、FL、IL-2,共孵育5周后獲取Naive T細(xì)胞并通過流式細(xì)胞術(shù)鑒定其表型.3、MSCs與Naive T細(xì)胞共孵育:將體外培養(yǎng)獲取的Naive T細(xì)胞種入經(jīng)照射近融合的MSCs中,對照組為單獨MSCs培養(yǎng)和單獨Naive T細(xì)胞培養(yǎng).孵育7天后,取上清用ELISA定量檢測IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10,并應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測共孵育