雌性激素受體ER與PGR基因在經(jīng)前期綜合征模型動物下丘腦中的表達研究.pdf

1、經(jīng)前期綜合征(Premenstrual Syndrome，PMS)，是指一組反復發(fā)生在經(jīng)前，影響婦女日常生活和工作，涉及軀體和精神兩方面的癥候群。PMS是育齡婦女發(fā)病率較高的疾病之一，在20～40歲之間的女性最為普遍。但由于采用的診斷標準和個體反應性的不同，其發(fā)病率差異很大，據(jù)估計育齡婦女中約90﹪至少有一種PMS癥狀，而大約有20～40﹪的婦女正常生活會到影響。PMS的病因及發(fā)病機制目前仍不明確，多數(shù)學者研究認為，中樞神經(jīng)系統(tǒng)和其它靶

2、組織器官出現(xiàn)的PMS癥狀，可能是由于正常卵巢排卵引發(fā)的一系列復雜的神經(jīng)內(nèi)分泌反應的結果。近年來，有關PMS病因和病理生理的研究涉及環(huán)境、內(nèi)分泌系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)之間的相互作用以及遺傳因素。目前比較集中的一個研究方向是雌激素和孕激素在中樞神經(jīng)系統(tǒng)調控網(wǎng)絡中的作用。與研究地日漸透徹的雌性激素在PMS發(fā)病中的作用相比，目前關于其中樞神經(jīng)系統(tǒng)受體在PMS發(fā)病過程中的表達情況卻仍就缺乏充足的研究。 本論文的研究內(nèi)容是作為PMS肝氣逆證模型

3、動物發(fā)病分子機理研究的一個部分，以PMS模型獼猴和大鼠為對象，將PMS發(fā)病與下丘腦內(nèi)雌性激素受體的表達情況聯(lián)系起來，探究PMS實驗動物模型下丘腦中雌性激素受體的表達情況，為探明雌性激素及其受體在PMG發(fā)病中的作用機理提供實驗依據(jù)。 首先提取獼猴下丘腦總RNA，反轉錄獲得總cDNA，參照已報道的獼猴ERa、ERB、PGR基因設計引物，利用巢式PCR的方法擴增得到上述受體基因，構建載體質粒并轉化大腸桿菌培養(yǎng)擴增；以質粒載體所含目的基

4、因片段為模板體外轉錄制備地高辛探針標記ERa、ERB、PGR基因的cRNA探針，組織切片原位雜交分析ERa mRNA、ERB mRNA、PGR mRNA在PMS模型獼猴下丘腦和正常獼猴下丘腦中的表達差異：同時，采用免疫組織化學分析ERB蛋白在PMS模型獼猴下丘腦和正常獼猴下丘腦中的表達情況：并且使用simplePCI軟件分析對實驗結果進行統(tǒng)計分析。結果顯示，ERa mRNA、ERB mRNA在PMS模型獼猴下丘腦中轉錄水平的表達相對其在

5、正常獼猴下丘腦中的表達均出現(xiàn)下調；ERB蛋白在PMS模型獼猴下丘腦中的表達相對其在正常獼猴下丘腦中的表達亦出現(xiàn)下調現(xiàn)象：PGR mRNA在PMS模型獼猴下丘腦中轉錄水平的表達相對其在正常獼猴下丘腦中的表達出現(xiàn)上調。 大鼠實驗方面，利用雌性性成熟wistar大鼠構建PMS肝氣逆證模型，以與獼猴實驗類似的實驗方法路線研究ERa mRNA、ERβ mRNA、PGR mRNA和ERβ蛋白在PMS模型大鼠下丘腦與正常大鼠下丘腦內(nèi)的表達差異

6、；同時，提取PMS模型大鼠下丘腦和正常大鼠下丘腦總RNA進行RT-PCR分析。結果顯示ERamRNA、ERβ mRNA在PMS模型大鼠下丘腦相對正常大鼠下丘腦內(nèi)的表達水平均出現(xiàn)下調；PGR mRNA在PMS模型大鼠下丘腦相對正常大鼠下丘腦內(nèi)的表達水平出現(xiàn)上調。 我們的實驗結果顯示，PMS獼猴和PMS大鼠下丘腦內(nèi)雌激素受體表達出現(xiàn)下調而孕酮受體表達出現(xiàn)上調，我們認為這可能對雌性激素與下丘腦內(nèi)其它激素和遞質相互作用起到了弱化作用，涉