正電子成像在神經(jīng)干細(xì)胞移植治療帕金森病中的在體顯像研究.pdf

1、【目的】隨著神經(jīng)干細(xì)胞移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究的逐漸深入，在體監(jiān)測(cè)干細(xì)胞分布、存活、分化、功能狀態(tài)及治療效果等特征性信息的檢測(cè)方法越顯重要。本課題以正電子成像技術(shù)(PET)作為在體可視化監(jiān)測(cè)手段，客觀準(zhǔn)確地顯示神經(jīng)干細(xì)胞移植治療帕金森病(PD)干細(xì)胞分化結(jié)果和移植治療效果，建立活體干細(xì)胞治療的無(wú)創(chuàng)性監(jiān)測(cè)技術(shù)平臺(tái)，探索干細(xì)胞體內(nèi)誘導(dǎo)分化的規(guī)律、條件、質(zhì)量控制和影響因素等，完善神經(jīng)干細(xì)胞移植的臨床評(píng)估方案，并為其他干細(xì)胞治療應(yīng)用探索提供研究

2、基礎(chǔ)。 【材料與方法】從自然流產(chǎn)的人胚胎眼球中分離、培養(yǎng)出人胚胎視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)，經(jīng)流式細(xì)胞技術(shù)、G顯帶染色體分析、體外誘導(dǎo)分化、逆轉(zhuǎn)錄PCR分析及免疫熒光染色方法進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞特異性鑒定。 建立帕金森病SD大鼠模型，隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組。利用立體定位技術(shù)將RPE細(xì)胞移植于治療組PD模型大鼠紋狀體內(nèi)；對(duì)照組大鼠紋狀體內(nèi)移植相同劑量的生理鹽水。 根據(jù)移植前后大鼠旋轉(zhuǎn)行為改善及腦紋狀體酪氨酸羥化酶(TH

3、)免疫組織化學(xué)染色改變?cè)u(píng)估干細(xì)胞分化結(jié)果和移植治療效果。 確定多巴胺D2受體、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT)為RPE細(xì)胞分化細(xì)胞(即多巴胺神經(jīng)元)的標(biāo)志物，11C-Raclopride、11C-β-CFT為相應(yīng)的PET成像放射性示蹤劑。進(jìn)行移植前后的11C-Raclopride、11C-β-CFTPET顯像，觀測(cè)D2受體及DAT變化情況，并運(yùn)用視覺(jué)分析、感興趣區(qū)(ROI)方法分析治療組、對(duì)照組移植前后顯像變化，并對(duì)結(jié)果做統(tǒng)計(jì)分析。

4、 【結(jié)果】經(jīng)鑒定RPE細(xì)胞具有神經(jīng)干細(xì)胞特征，并能在一定誘導(dǎo)條件下分化為多巴胺能(DA)神經(jīng)元。 移植前1～4周、移植后1～8周大鼠旋轉(zhuǎn)行為檢測(cè)結(jié)果：治療組由移植前296±82圈/30分鐘下降至212±102(p=0.0008)；而對(duì)照組移植前(299±72)、移植后(310±85)，臨床表現(xiàn)無(wú)改善(p=0.4259)。 TH免疫組化染色顯示移植后治療組大鼠紋狀體內(nèi)TH陽(yáng)性細(xì)胞增多、著色較深。而對(duì)照組與移植前比較無(wú)明

5、顯變化。 11C-RaclopridePET成像顯示模型動(dòng)物損傷側(cè)D2受體上調(diào)，表現(xiàn)為兩側(cè)不對(duì)稱。移植后對(duì)照組大鼠(注射生理鹽水)兩側(cè)紋狀體顯影無(wú)明顯變化，仍為患側(cè)(右側(cè))顯示較對(duì)側(cè)濃聚。而治療組大鼠(移植神經(jīng)干細(xì)胞)患側(cè)紋狀體顯示放射性濃聚不同程度下降，兩側(cè)基本對(duì)稱。ROI方法測(cè)量紋狀體/小腦比值，對(duì)照組兩側(cè)移植前后比較無(wú)明顯變化(p均小于0.05)，兩側(cè)差異仍然存在；而治療組兩側(cè)比較由移植前p=0.018變?yōu)橐浦埠髉=0.0

6、834，說(shuō)明兩側(cè)間無(wú)明顯差異。 11C-β-CFT成像顯示模型動(dòng)物損傷側(cè)DAT下降，表現(xiàn)為兩側(cè)不對(duì)稱。移植后對(duì)照組大鼠兩側(cè)紋狀體顯影無(wú)明顯變化，仍為患側(cè)顯示較對(duì)側(cè)稀疏。而治療組大鼠患側(cè)紋狀體顯示放射性濃聚不同程度上調(diào)，兩側(cè)基本對(duì)稱。ROI方法測(cè)量紋狀體/小腦比值，對(duì)照組兩側(cè)移植前后比較無(wú)明顯變化(p均小于0.05)，兩側(cè)差異仍然存在；而治療組兩側(cè)比較由移植前p=0.001變?yōu)橐浦埠髉=0.6443，說(shuō)明兩側(cè)間無(wú)明顯差異。