ZD7288對(duì)正常和腦缺血后海馬Schaffer側(cè)枝-CA1區(qū)突觸傳遞和可塑性的影響.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)：
　　 第一部分 ZD7288 對(duì)海馬Schaffer 側(cè)枝-CA1 區(qū)突觸傳遞和長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)的影響
　　 研究背景和目的：超極化激活環(huán)核苷酸門(mén)控陽(yáng)離子通道（HCN 通道）在機(jī)體細(xì)胞廣泛表達(dá)，且在控制和調(diào)節(jié)細(xì)胞膜興奮性和神經(jīng)元節(jié)律性活動(dòng)中具有重要作用。研究顯示，HCN 通道可能參與大腦海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)的調(diào)節(jié)和促進(jìn)突觸整合及突觸可塑性。ZD7288(4-（N-乙基-N-苯氨基）-1,2-二甲基-6-

2、（甲氨基）嘧啶氯化物）是選擇性HCN 通道阻滯劑，我們以往的研究表明，ZD7288能抑制大鼠海馬PP-CA3 區(qū)群峰電位（PS）的幅值及抑制此區(qū)域長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)（LTP）的誘導(dǎo)。然而，ZD7288 對(duì)海馬Schaffer 側(cè)枝-CA1 區(qū)LTP的誘導(dǎo)和維持的作用還不明確。本研究探討ZD7288 對(duì)海馬CA1 區(qū)突觸傳遞、LTP的誘導(dǎo)和維持的影響，以及觀(guān)察直接激動(dòng)NMDA 受體后，ZD7288對(duì)LTP 誘導(dǎo)的影響。
　　 方法：應(yīng)用小

3、鼠離體海馬腦片和大鼠在體細(xì)胞外場(chǎng)電位記錄電生理技術(shù)，探討ZD7288 對(duì)海馬Schaffer 側(cè)枝-CA1 區(qū)突觸傳遞和高頻刺激誘導(dǎo)LTP的影響。
　　 結(jié)果：(1)小鼠離體海馬腦片場(chǎng)電位實(shí)驗(yàn)顯示：灌流10 μM ZD7288 對(duì)小鼠離體腦片海馬Schaffer 側(cè)枝-CA1 區(qū)基礎(chǔ)突觸傳遞沒(méi)有影響，50 μM ZD7288 顯著抑制CA1區(qū)基礎(chǔ)突觸傳遞；灌流10 μM ZD7288 可抑制CA1 區(qū)LTP的誘導(dǎo)產(chǎn)生。(2)大鼠

4、海馬CA1區(qū)在體場(chǎng)電位實(shí)驗(yàn)中顯示：經(jīng)側(cè)腦室注射給予0.5 ～10 μg ZD7288 對(duì)基礎(chǔ)突觸傳遞沒(méi)有影響，但高劑量（25 μg ZD7288）顯著抑制海馬Schaffer 側(cè)枝-CA1 區(qū)基礎(chǔ)突觸傳遞；0.5 ～10 μg ZD7288 可劑量依賴(lài)性抑制大鼠海馬Schaffer 側(cè)枝-CA1 區(qū)LTP 誘導(dǎo)；HFS 誘導(dǎo)LTP 產(chǎn)生后30min 經(jīng)側(cè)腦室注射給予10 μg ZD7288 顯示其對(duì)LTP的表達(dá)和維持沒(méi)有影響；經(jīng)側(cè)腦室注

5、射0.03 μg NMDA后3min 再注射5μg ZD7288，NMDA能部分逆轉(zhuǎn)ZD7288 對(duì)LTP 誘導(dǎo)的抑制作用。
　　 結(jié)論：ZD7288能調(diào)節(jié)海馬Schaffer 側(cè)枝-CA1 區(qū)突觸傳遞和抑制此區(qū)域LTP的誘導(dǎo)產(chǎn)生，直接激動(dòng)NMDA 受體可部分逆轉(zhuǎn)ZD7288 對(duì)LTP 誘導(dǎo)的抑制作用，另外，ZD7288 對(duì)已誘導(dǎo)產(chǎn)生的LTP的表達(dá)和維持沒(méi)有影響。
　　 第二部分 ZD7288 對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損

6、傷后海馬CA1 區(qū)突觸可塑性的影響
　　 研究背景和目的：缺血性腦血管疾病不僅是人類(lèi)常見(jiàn)死因之一，也是致殘的主要原因，腦缺血后除引起運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)神經(jīng)功能受損外，常導(dǎo)致認(rèn)知和學(xué)習(xí)記憶能力下降。海馬CA1 區(qū)是腦缺血后最易受損的部位之一，LTP是海馬突觸可塑性的重要形式，是學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。促進(jìn)腦內(nèi)尤其是海馬部位的突觸傳遞及突觸可塑性被認(rèn)為是改善腦缺血后認(rèn)知和學(xué)習(xí)記憶能力等神經(jīng)康復(fù)的重要策略之一。興奮性毒性是腦缺血缺氧導(dǎo)致神經(jīng)

7、元損傷或死亡的重要因素，興奮性毒性的一個(gè)重要級(jí)聯(lián)反應(yīng)是由于過(guò)度激動(dòng)谷氨酸受體，造成突觸后膜大規(guī)模的去極化和反常鈣內(nèi)流，引起鈣超載，導(dǎo)致病理性突觸改變，從而抑制活動(dòng)依賴(lài)性L(fǎng)TP的產(chǎn)生。本研究探討ZD7288 對(duì)腦缺血再灌注損傷后海馬CA1 區(qū)突觸可塑性變化的影響。
　　 方法：線(xiàn)栓法制備大鼠短暫局灶性腦缺血2h/再灌注48h 損傷模型，應(yīng)用在體細(xì)胞外場(chǎng)電位記錄電生理技術(shù)和real time PCR 技術(shù)，探討ZD7288 對(duì)大鼠局

8、灶性腦缺血再灌注損傷后海馬CA1 區(qū)LTP 誘導(dǎo)的作用，同時(shí)觀(guān)察其對(duì)海馬CA1 區(qū)NR2B和PSD-95mRNA表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：(1)ZD7288能降低大鼠腦缺血再灌注24 h和48 h 損傷后的神經(jīng)功能缺陷評(píng)分，同模型組比較，差異顯著(P＜0.05)；(2)大鼠局灶性腦缺血2h/再灌注48h后海馬CA1 區(qū)LTP的誘導(dǎo)受損，而在缺血后30 min及3h 經(jīng)側(cè)腦室注射給予ZD7288 可減輕腦缺血再灌注損傷對(duì)CA1 區(qū)

9、LTP 誘導(dǎo)產(chǎn)生的抑制作用；(3)缺血2h/再灌注48h后，海馬CA1區(qū)NR2B和PSD-95 mRNA的表達(dá)同假手術(shù)組比較明顯下調(diào)，而經(jīng)側(cè)腦室注射ZD7288能抑制大鼠腦缺血再灌注損傷后CA1 區(qū)NR2B和PSD-95 mRNA表達(dá)的下調(diào)。
　　 結(jié)論：ZD7288能減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷致Schaffer 側(cè)枝-CA1 區(qū)LTP誘導(dǎo)的抑制，抑制CA1 區(qū)NR2B和PSD-95 mRNA表達(dá)的下調(diào)，從而改善腦缺血再灌注