啟東肝癌中AKR1C2基因的突變、表達特征及其致癌機制研究.pdf

1、南京師范大學博士學位論文啟東肝癌中AKR1C2基因的突變、表達特征及其致癌機制研究姓名：陸東東申請學位級別：博士專業(yè)：細胞生物學指導教師：張錫然20031101啟東肝癌中A K R l C 2 基因的突變、表達特征及其致癌機制研究陸東東： 張錫然( 導師)南京師范大學生命科學學院中文摘要本文以A K R 。C 。( A 1 d o —K e t o R e d u c t a s eI C I I ) 序列( A B 0 2 1 6 5

2、 ) 為信息探針，利用生物信息學同源篩選的方法，拚接其全長序列，對其結構與功能進行預測。以乙型肝炎病毒( H B V ) 感染、黃曲霉毒素B ，( A F B 。) 污染、P 5 3 基因高度突變?yōu)橹饕虻膯|高發(fā)區(qū)肝癌患者( 共1 7 0 例) 及啟東肝癌細胞株Q G Y 7 7 0 3 為研究對象，以A K R ．C 。為目標基因，參照生物信息學模擬分析結果，借助分子細胞生物學手段，如R T - P C R 、N o r t h e

3、r nb l o t 、S o u t h e r nb l o t 、w e s t e r nb l o t 、5 ’、3 ’一R A C E 、P C R —S S C P 、直接序列分析、免疫組化、原位雜交、多克隆抗體的制備、真核轉染、基因框移突變的構建、體內外致瘤能力測定、基因表達芯片、反義基因轉染、免疫共沉淀、酵母雙雜交等，對A K R ．C 。基因在啟東肝癌及其癌旁組織中的突變、表達特征及其致肝癌機制進行研究。本研究中R

4、A C E 分析結果顯示：A K R ，C 。c D N A 全長序列為1 8 6 5 b p ，5 7 非編碼序列為2 5 3 b p ，3 ’非編碼序列為6 4 0 b p ，起始密碼子為A T G ，終止密碼子為T A A ，開放閱讀框( O R F ) 為9 7 2 b p 。所擴增的長度為的9 8 5 b p 的A K R 。C ?；虻钠? 以o R F設計引物) ，用同位索摻入標記做為雜交探針，與印有3 6 種人類組織m

5、 R N A 的M T N膜進行N o r t h e r n 雜交。結果顯示人類A K R 。C 。基因的表達譜：心、胎盤、直腸、肝、骨骼肌、卵巢、前列腺、大腸、盲腸、胸腺、睪丸、附睪、輸卵管、盲腸、鼻、乳房、胃組織中A K R 。C ：中均檢出一種大約為1 ．9 k b 的剪接本，在毛發(fā)組織中檢出一種大約為1 ．2 k b 的剪接本。在肝臟、前列腺、大腸、盲腸、附睪、輸卵管中表達遠遠高于其它組織，即存在一定的組織表達特異性。迭加A