高純度納米雄黃的制備及其對HepG2細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用的研究.pdf

1、目的:探討高純度納米雄黃的制備方法，以制備高純度，高生物利用度，低毒副作用的純化納米雄黃顆粒，并初步研究其對HepG2細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用。
　　方法:(1)高純度納米雄黃制備方法:1）天然雄黃經(jīng)去離子水和不同濃度的HCl、NaOH純化處理后得到純化雄黃;2）天然雄黃、純化雄黃經(jīng)高能球磨法制備得到天然納米雄黃、純化納米雄黃;3）天然納米雄黃、純化納米雄黃經(jīng)2.0M HCl純化得天然納米雄黃（純化組）、純化納米雄黃（純化組），所有組別雄

2、黃顆粒均測定顆粒形貌、粒徑和As2S2含量。(2)高純度納米雄黃顆粒對HepG2細(xì)胞凋亡作用研究:1）MTT法檢測不同濃度雄黃顆粒作用于HepG2細(xì)胞增殖率，篩選最佳作用濃度及作用時(shí)間;2）HepG2細(xì)胞經(jīng)20.0μg/mL的不同雄黃顆粒作用24小時(shí)后觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、流式細(xì)胞儀測定凋亡率、Real-time PCR法測定Bcl-2和Bax mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1)天然雄黃經(jīng)去離子水和不同濃度的HCl與NaOH純化處

3、理后AS2S2含量均有所提高，各處理組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)高能球磨法可成功制得納米級雄黃顆粒，天然納米雄黃、純化納米雄黃、天然納米雄黃（純化組）、純化納米雄黃（純化組）粒度分別為(135.13±4.69) nm、(134.39±2.33) nm、(135.28±1.37) nm、(134.73±2.22) nm; AS2S2含量分別為(92.15±0.37)％、(97.05±0.21)％、(97.42±0.05)

4、％、(98.33±0.04)％。純化處理可提高雄黃顆粒純度(P＜0.05)，而對顆粒粒徑無影響(P＞0.05)。(3) MTT法結(jié)果顯示HepG2細(xì)胞經(jīng)不同組別雄黃顆粒處理后增殖率均有不程度降低，且具有時(shí)間效應(yīng)和濃度效應(yīng)，通過MTT篩選出最佳作用濃度及作用時(shí)間為20.0μg/mL和24h。(4)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測及流式細(xì)胞儀證實(shí)不同雄黃顆粒均可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生凋亡，其中以純化納米雄黃（純化組）作用最為顯著，其機(jī)制可能與下調(diào)Bcl-2表