開文通對腦缺血再灌注損傷炎性反應(yīng)的影響.pdf

1、目的：
　　本研究對腦缺血再灌注損傷進(jìn)行不同劑量長春西汀干預(yù)，檢測不同時(shí)間點(diǎn)炎性因子的表達(dá)變化，以求進(jìn)一步探討長春西汀對大鼠腦缺血再灌注損傷炎性反應(yīng)機(jī)制的影響，為長春西汀作為抗炎制劑在臨床中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　將Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、腦缺血再灌注損傷組和長春西汀中劑量組，長春西汀大劑量組，應(yīng)用線栓法制備大腦中動脈閉塞2h后再灌注模型，分別于再灌注6h、12h、24h、3d進(jìn)行神經(jīng)功能評

2、分，采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2，3，5-triphenyi terazoloride，TTC）染色法檢測腦梗死灶體積大小，采用干、濕重法檢測腦組織含水量以評價(jià)腦水腫的程度，通過HE染色觀察神經(jīng)元變性壞死，采用免疫組織化學(xué)、原位雜交和蛋白印跡實(shí)驗(yàn)的方法檢測大鼠核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor-kappa B，NF-κB)、腫瘤壞死因子（TNF-α）的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　神經(jīng)功能評分:假手術(shù)組無神經(jīng)功能

3、評分缺損，其余各組神經(jīng)功能缺損評分均顯著增高(P＜0.01);與模型組比較，開文通中、大劑量組在12h和24h、3d時(shí)點(diǎn)神經(jīng)功能缺損評分降低有顯著差異(P＜0.05);開文通不同劑量組3d時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能缺損評分降低有顯著差異(P＜0.05)。
　　腦梗死體積測定:假手術(shù)組經(jīng)TTC染色無腦梗死出現(xiàn)，其余組別腦梗死體積均顯著增高(P＜0.01);與模型組比較，開文通干預(yù)組在24h、3d時(shí)間點(diǎn)和腦梗死體積降低有顯著差異(P＜0.05);

4、開文通不同劑量組24、3d時(shí)腦梗死體積降低有顯著差異(P＜0.05)。
　　HE染色:光鏡下缺血再灌注后6h即能觀察到神經(jīng)細(xì)胞核固縮，形態(tài)變形，神經(jīng)元周圍未見明顯水腫，至再灌24h和3d時(shí)損害效應(yīng)明顯，可見大量深染的神經(jīng)元細(xì)胞核，核固縮、致密，大部分細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)消失，水腫明顯。
　　NF-κB的免疫組化測定:與假手術(shù)組比較，其余各組NF-κB的陽性表達(dá)均有顯著差異(P＜0.01);與模型組比較，開文通干預(yù)組都在12h-3d時(shí)

5、點(diǎn)NF-κB的陽性表達(dá)降低有顯著差異(P＜0.01);開文通不同劑量組24h、3d時(shí)點(diǎn)NF-κB的陽性表達(dá)降低有顯著差異(P＜0.01)。
　　TNF-α的免疫組化測定:與假手術(shù)組比較，其余各組TNF-α的陽性表達(dá)均有顯著差異(P＜0.01);與模型組比較，開文通干預(yù)組在24h、3d時(shí)點(diǎn)TNF-α的陽性表達(dá)降低有顯著差異(P＜0.01)，開文通大劑量組12h時(shí)點(diǎn)TNF-α的陽性表達(dá)降低也有顯著差異(P＜0.01);開文通不同劑量組

6、24h、3d時(shí)點(diǎn)TNF-α的陽性表達(dá)降低有顯著差異(P＜0.01)。
　　Western blot測定Nucleus P65表達(dá):與假手術(shù)組比較，12h時(shí)模型組和長春西汀大劑量治療組NF-κB表達(dá)增高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與模型組比較，12h長春西汀大劑量組NF-κB表達(dá)降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，核內(nèi)的P65亞基表達(dá)在24h時(shí)點(diǎn)達(dá)到了高峰，24h時(shí)點(diǎn)NF-κB的P65表達(dá)增高相較其余時(shí)點(diǎn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

7、，48h仍維持較高的活化水平，但較24h表達(dá)下降。
　　原位雜交測定NF-κB mRNA表達(dá):與模型組比較，開文通中劑量組在12h-3d時(shí)間點(diǎn)NF-κBmRNA的陽性表達(dá)降低有顯著差異(P＜0.01);與模型組比較，開文通大劑量組4個(gè)時(shí)間點(diǎn)NF-κB的陽性表達(dá)降低有顯著差異(P＜0.01);與開文通中劑量組比較開文通大劑量組12h-3d時(shí)間點(diǎn)NF-κB的陽性表達(dá)降低有顯著差異(P＜0.01);組內(nèi)比較在24h時(shí)間點(diǎn)，三組陽性表達(dá)有

8、顯著差異(P＜0.01)。
　　原位雜交測定TNF-αmRNA表達(dá):與模型組比較，開文通中劑量組在12h、24h、3d時(shí)間點(diǎn)TNF-αmRNA的陽性表達(dá)降低有顯著差異(P＜0.01);與模型組比較，開文通大劑量組4個(gè)時(shí)間點(diǎn)TNF-α的陽性表達(dá)降低有顯著差異(P＜0.01);與開文通中劑量組比較開文通大劑量組24h、3d時(shí)間點(diǎn)TNF-α的陽性表達(dá)降低有顯著差異(P＜0.01);組內(nèi)比較在24h時(shí)間點(diǎn)，三組陽性表達(dá)有顯著差異(P＜0.