Hsulf-1過(guò)表達(dá)對(duì)肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549凋亡的影響并老年肺癌病例分析.pdf

1、早期肺癌多不易被發(fā)現(xiàn)，臨床中許多患者確診已是中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳手術(shù)時(shí)機(jī)，所以多采用傳統(tǒng)化療及放療方法治療腫瘤疾病。但由于傳統(tǒng)放化療方法自身的局限性，腫瘤的治療效果并不十分理想，因此，探索新的治療方案是目前腫瘤研究的熱點(diǎn)。
　　目的:利用轉(zhuǎn)染技術(shù)誘導(dǎo)Hsulf-1在肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中過(guò)表達(dá)，觀察其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，探討Hsulf-1在抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞凋亡中的作用。為Hsulf-1能否成為臨床肺癌治療的新方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。分

2、析老年肺癌病例，證實(shí)體檢對(duì)肺癌的早期診斷與及時(shí)診斷具有重要的臨床價(jià)值。
　　方法:人工合成質(zhì)粒以誘導(dǎo)Hsulf-1在肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中過(guò)表達(dá)，應(yīng)用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將合成的攜帶Hsulf-1的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到肺腺癌A549細(xì)胞內(nèi)，在相差倒置顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染48小時(shí)后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)不同轉(zhuǎn)染細(xì)胞組之間Hsulf-1mRNA的表達(dá)差異;應(yīng)用免疫印跡法(Western

3、blot)技術(shù)檢測(cè)不同轉(zhuǎn)染細(xì)胞組之間Hsulf-1蛋白的表達(dá)差異;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同轉(zhuǎn)染細(xì)胞組之間凋亡率的差異。選擇老年肺癌病例進(jìn)行分析，并與術(shù)后病理結(jié)果對(duì)比，探討影像學(xué)檢查對(duì)早期發(fā)現(xiàn)肺癌的臨床意義。
　　結(jié)果:將人工合成攜帶Hsulf-1的質(zhì)粒通過(guò)脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染入肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549并成功表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)受到明顯抑制，同時(shí)凋亡增加。相差倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染前后形態(tài)變化:轉(zhuǎn)染前，細(xì)胞貼

4、壁生長(zhǎng)情況良好，細(xì)胞形態(tài)呈扁平樣，向四周伸出多個(gè)突起，細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)圓形細(xì)胞核，核仁一至多個(gè);轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡形態(tài)，貼壁不佳，漂浮細(xì)胞增多，核膜破裂，細(xì)胞皺縮成團(tuán)，突起消失。RT-PCR檢測(cè)Hsulf-1mRNA的表達(dá)，結(jié)果表明經(jīng)過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞，Hsulf-1的mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)，分別對(duì)比空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組Hsulf-1mRNA的表達(dá)水平，轉(zhuǎn)染組的上調(diào)變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說(shuō)明攜帶Hsulf-1基因的質(zhì)粒可特異性

5、提高Hsulf-1mRNA在細(xì)胞中的表達(dá)。Westernblot檢測(cè)Hsulf-1蛋白的表達(dá)，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染組Hsulf-1蛋白的表達(dá)水平在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞48小時(shí)后明顯提高，分別對(duì)比空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組Hsulf-1蛋白的表達(dá)水平，轉(zhuǎn)染組的上調(diào)變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說(shuō)明攜帶Hsulf-1基因的質(zhì)?？商禺愋蕴岣逪sulf-1蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率:結(jié)果顯示空白對(duì)照組(0.58±0.21)％，陰性對(duì)照組(0.74±

6、0.13)％，轉(zhuǎn)染組(19.53±0.32)％，說(shuō)明Hsulf-1過(guò)表達(dá)可使細(xì)胞凋亡增加。病例的75％其影像學(xué)結(jié)果與病理報(bào)告一致，體檢可以作為早期發(fā)現(xiàn)肺癌的重要手段。
　　結(jié)論:通過(guò)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒靶向提高Hsulf-1基因在肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中的表達(dá)水平可使A549細(xì)胞凋亡明顯增加，同時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，Hsulf-1可能成為治療肺癌的一個(gè)新的基因靶點(diǎn)。影像學(xué)發(fā)現(xiàn)有小結(jié)節(jié)表現(xiàn)的患者，可長(zhǎng)期隨診，對(duì)于近期突然進(jìn)行性變化需警惕癌變可能。體