茯苓性模式的研究.pdf

1、茯苓Wolfiporia cocos（Schw.）Ryv.&Gilbn．是一種高等擔(dān)子菌，一般腐生或寄生在松科植物赤松Ginkgo biloba Linn．和馬尾松Pinus massoniana Lamb.根部，其地下生長的菌核（sclerotium）是一種傳統(tǒng)中藥，具有較好的營養(yǎng)價值和藥用價值。 以11個不同來源的茯苓菌株為材料，研究了茯苓菌絲體、子實體及擔(dān)孢子的形態(tài)特征及適宜的生長、發(fā)育條件。結(jié)果表明，茯苓菌絲體為少分枝、

2、有隔膜、無鎖狀聯(lián)合的多核菌絲，菌絲核數(shù)目不定，一般為6～30個，同一細(xì)胞中的核往往表現(xiàn)為兩兩較為靠近。茯苓擔(dān)孢子核相以雙核為主，雙核孢子，單核孢子和無核孢子分別占87.2％，4.7％和8.1％。在28℃條件下，茯苓菌絲體在PDPA培養(yǎng)基上生長最為迅速，茯苓菌絲的適宜生長條件還包括良好的通氣狀況。 武漢市5～7月份中，實驗室溫度26℃左右，空氣相對濕度75％左右，茯苓菌核組織分離所得的菌絲轉(zhuǎn)管24d后就能開始形成子實體，同其他階段

3、相比，此階段形成子實體的試管數(shù)量最多，形成子實體所需時間也最短。26℃條件下孢子萌發(fā)率最高，為47.2％。擔(dān)孢子萌發(fā)形成的菌絲較為濃密，呈白色短絨狀，氣生菌絲不明顯，生長緩慢。單孢萌發(fā)菌絲形成的菌落形態(tài)差異明顯，菌絲生長速度、氣生菌絲濃密程度均有明顯差異。 研究了3種不同熒光染料對茯苓菌絲體的適宜染色條件，結(jié)果表明，Hoechesl33258濃度為50μg／ml～75μg／ml，染色時間為4min～6min時能夠得到最佳的成像結(jié)

4、果，DAPI濃度為4μg／ml，染色時間為4min左右時能夠得到最佳的成像結(jié)果，F(xiàn)luorescent Brightener 28的染色能力很強，濃度為到1μg／ml，染色時間為1min時，即能觀察到比較清晰的物像。兩種核染料（Hoechest 33258和Fluorescent Brightener28）對茯苓擔(dān)孢子的適宜染色條件同對菌絲體的適宜染色條件相同。茯苓菌絲體的適宜雙重染色條件為，75μg／ml的Hoechst 33258染

5、色4min，再用2μg／ml的Fluorescent Brightener 28染色1min。上述適宜熒光染色條件對豬苓菌絲體和單孢子染色同樣適用。 對茯苓菌絲體原生質(zhì)體化條件進行了初步研究，當(dāng)使用的溶壁酶濃度為2％，用量為每克菌絲2ml時，綜合考慮原生質(zhì)體產(chǎn)量和再生率，確定茯苓菌絲體最合適的酶解溫度為32℃，酶解時間為3.5h。 配對試驗結(jié)果表明，同一菌株及不同菌株原生質(zhì)體分離株間的配對均能和諧生長，同一菌株擔(dān)孢子間的