中藥復方有效物質(zhì)沉淀合大孔樹脂富集制備技術研究.pdf

1、本論文分為五個部分。第一部分文獻綜述從傳統(tǒng)醫(yī)學研究在世界范圍內(nèi)的復蘇說起，對中藥復方研究的現(xiàn)狀與新進展從復方化學研究思路，復方配伍研究，以及研究技術手段三個方面進行了綜述，并用研究實例進行了說明，對研究中的不足與問題進行了總結。 針對黃連解毒湯和葛根芩連湯，分別對其全方的化學成分研究、藥理研究進行了綜述；并對其配伍化學、藥理研究進行了整理和歸納；討論了二方的生產(chǎn)工藝及研究現(xiàn)狀，并引出本論文研究試圖解決的問題。 第二部分復

2、方有效物質(zhì)沉淀合大孔樹脂富集制備技術研究第一章黃連解毒湯有效部位沉淀合大孔樹脂富集制備技術研究對黃連解毒湯有效部位制備工藝進行研究，得出最佳提取工藝為：B％乙醇回流提取N3次，每次加醇B1倍體積量，回流提取Tlmin。其沉淀制備工藝研究結論為：將提取液濃縮至原體積的A1倍后，在原液狀態(tài)下加入A鹽，使溶液中的鹽濃度達到Clmol/l，再在室溫下放置過夜，過濾，得沉淀。最后，對所得濾液的大孔樹脂富集工藝進行研究，結論為：使用C型大孔吸附樹脂

3、，用原濾液，以L2ml/min的流速上樣，樹脂徑高比為1：H2，按照上樣液體積與樹脂體積比為V3：1進行動態(tài)吸附，水洗脫xBV，洗脫劑采用B％乙醇，洗脫量為約yBV，洗脫流速為L2ml/min。 三批樣品的制備和含量測定結果表明，提取物得率平均為23.48％，總黃酮含量平均為21.06％，總生物堿含量平均為11.22％，總環(huán)烯醚萜含量平均為13.30％，梔子苷含量平均為5.92％；總黃酮提取率平均為96.43％，總生物堿提取率平

4、均為83.16％，總環(huán)烯醚萜提取率平均為98.94％。 沉淀物得率平均為7.38％，總黃酮含量平均為33.85％，總生物堿含量平均為22.91％，總環(huán)烯醚萜含量平均為0.99％；總黃酮轉移率平均為49.02％，總生物堿轉移率平均為51.25％，總環(huán)烯醚萜轉移率平均為2.33％。 濾液大孔樹脂富集物得率平均為6.04％，總黃酮含量平均為28.21％，總生物堿含量平均為11.91％，總環(huán)烯醚萜的含量平均為31.15％；總黃酮

5、轉移率平均為33.33％，總生物堿轉移率平均為21.81％，總環(huán)烯醚萜轉移率平均為60.64％。 總制備物得率平均為13.42％，總黃酮含量平均為31.30％，總生物堿含量平均為17.96％，總環(huán)烯醚萜的含量平均為14.55％；總黃酮轉移率為82.35％，總生物堿轉移率為73.06％，總環(huán)烯醚萜轉移率為62.97％。工藝穩(wěn)定性良好，簡便可行。 第二章葛根芩連湯有效部位沉淀合大孔樹脂富集制備技術研究對葛根芩連湯有效部位制備

6、工藝進行研究，得出最佳提取工藝為：全方，B％乙醇回流合提N2次，每次加醇B1倍體積量，回流提取T1min。還對其沉淀制備工藝進行了研究，結論為：將提取液濃縮至原體積的A1倍后，在原液狀態(tài)下加入A鹽，使溶液中的鹽濃度達到C4mol/l，再在室溫下放置過夜，過濾，得沉淀。最后，對所得濾液的大孔樹脂富集工藝進行研究，結論為：使用C型大孔吸附樹脂，用原濾液，以L2ml/min的流速上樣，樹脂徑高比為1：H2，按照上樣液體積與樹脂體積比為V7：1

7、進行動態(tài)吸附，水洗脫xBV，洗脫劑采用B％乙醇，洗脫量為yBV，洗脫流速為L2ml/min。 三批樣品的制備和含量測定結果表明，提取物得率平均為23.42％，總黃酮含量平均為23.20％，總生物堿含量平均為9.14％，葛根素含量平均為1.67％，甘草酸含量平均為1.11％；總黃酮提取率平均為96.36％，總生物堿提取率為91.14％，葛根素提取率為90.77％，甘草酸提取率為94.20％。 沉淀物得率平均為5.44％，總

8、黃酮含量平均為37.40％，總生物堿含量平均為19.38％；總黃酮轉移率平均為38.47％，總生物堿轉移率平均為47.73％。 大孔樹脂富集物得率平均為7.97％，總黃酮含量平均為30.95％，總生物堿含量平均為11.49％；總黃酮轉移率平均為43.64％，總生物堿轉移率平均為38.83％。 總制備物的得率平均為13.77％，總黃酮含量平均為33.67％，總生物堿含量平均為14.81％；總黃酮轉移率為82.13％，總生物

9、堿轉移率為86.56％。工藝穩(wěn)定性良好，簡便可行。 第三部分質(zhì)量控制方法的建立第一章葛根芩連湯中甘草酸含量測定方法的建立葛根芩連湯中甘草酸含量測定方法，色譜條件：色譜柱YWG-C18(250mm×4.6mm，10μm)；流動相：甲醇：0.2mol/l醋酸銨：冰醋酸(64.5：35.5：1)；流速：0.7mL/min；檢測波長：250nm;柱溫：室溫。 第二章黃連解毒湯中總黃酮和總環(huán)烯醚萜含量測定方法的建立黃連解毒湯中總黃

10、酮的測定方法：樣品用70％乙醇溶解，精密量取適量樣品液至10.0mL刻度試管內(nèi)(內(nèi)有250mg鎂粉)，將刻度試管置于冷水中，定量加入鹽酸2.0mL(一次0.2mL，分十次加入，20min內(nèi)加完)。反應完畢后，至于沸水浴中加熱1小時，取出，冷水沖涼，乙醇定容至10.0mL，搖勻。在424nm處測定吸光度。 黃連解毒湯中總環(huán)烯醚萜的測定方法：樣品用30％乙醇溶解，精密量取供試品溶液適量，加入相應量的磷鉬酸試劑，使產(chǎn)生沉淀，過濾后，以

11、4ml經(jīng)過中性氧化鋁柱純化(柱內(nèi)徑0.9cm，內(nèi)裝氧化鋁4g)，用無水乙醇洗脫10ml。取適量洗脫液，蒸干。先加入5％的香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml。搖勻后，放置10min，放入60℃水浴中，加熱15min，取出，冷水浴冷卻10min，再加入5ml冰醋酸，搖勻。在540nm處測定吸光度. 上述測定方法均有良好的精密度和重復性，回收率合格，測定結果準確可信。 第四部分指紋圖譜比較研究對合提提取物，沉淀

12、工藝制備所得沉淀物，濾液大孔樹脂富集物；以及分提配比物，水分散沉淀物，濾液大孔樹脂富集物上述6個樣品進行了HPLC指紋圖譜比較，分析各圖譜可以看出，二方合提物和分提配比物化學成分基本類似，從各主要成分的量來看，合提經(jīng)沉淀工藝后黃芩苷、小檗堿等主要化學成分在沉淀中分布較多，比分提后水分散所得沉淀中的量明顯增加。相應經(jīng)沉淀工藝后在濾液大孔樹脂富集的過程中則減輕了樹脂柱的負載。指紋圖譜比較研究的結果進一步佐證了該工藝的合理性和可行性。