矮生二裂委陵菜抗2型糖尿病作用機制研究.pdf

1、采用天然產物化學分離技術與α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶和醛糖還原酶體外篩選模型相結合，篩選矮生二裂委陵菜（Potentilla bifurca var. humilior）中的高活性酶抑制組分。建立2型糖尿病實驗動物模型，研究矮生二裂委陵菜高活性組分對糖脂代謝和氧化應激的影響，并采用RT-PCR技術對糖脂代謝關鍵酶和激素mRNA表達進行測定，探討矮生二裂委陵菜抗2型糖尿病的作用機制。
　　1、采用ICP-MS法對矮生二裂委陵菜中的M

2、g、K、Ca、Cr、Cu、Zn、As、Se、Mo、Cd、Hg和Pb這12種元素含量進行測定。結果表明，與糖脂代謝相關的Mn（54.76μg/g）、Cr（3.352μg/g）、Se（0.006406μg/g）等微量元素含量高于同類中藥材；重金屬、有害元素Pb、Cd、As、Hg含量均在《中華人民共和國藥典》和《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》規(guī)定的安全標準范圍內。
　　2、采用乙醇回流提取，石油醚、乙酸乙酯萃取法，對矮生二裂委陵菜不

3、同極性部位進行提取，并以蘆丁為對照品，對總黃酮中黃酮含量進行測定。測得總黃酮中黃酮含量為50.28％，原植物中總黃酮含量為4.97%。
　　3、建立α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶和醛糖還原酶抑制劑體外篩選模型，分別對矮生二裂委陵菜3種不同提取物的酶抑制活性進行篩選。結果，矮生二裂委陵菜總黃酮在3種酶抑制中均表現(xiàn)出最高抑制活性，半數抑制濃度分別為0.273、0.004和0.312 mg/mL。
　　4、采用半數致死量和最大耐受量實

4、驗對矮生二裂委陵菜進行急性毒性試驗。結果表明，在最大可灌胃劑量下半數致死量未測出，說明矮生二裂委陵菜在小鼠最大可灌胃劑量下毒性較低，最大耐受量為10 g·Kg-1/d。
　　5、采用小鼠糖耐量模型，以矮生二裂委陵菜總黃酮為實驗藥物，觀察矮生二裂委陵菜總黃酮對淀粉負荷后的正常小鼠血糖的影響。結果表明，矮生二裂委陵菜總黃酮高、低劑量組血糖值與空白組相比在淀粉負荷15min后差異極顯著。表明矮生二裂委陵菜總黃酮能夠提高正常小鼠的耐糖量。

5、
　　6、建立2型糖尿病實驗動物模型，以矮生二裂委陵菜總黃酮為實驗藥物，觀察其對實驗動物血糖和糖尿病癥狀的影響。結果表明，矮生二裂委陵菜總黃酮高、低劑量組給藥14d后降糖率分別為14.08%和9.72%，給藥28 d后的降糖率分別為36.51%和30.86%；與模型組相比矮生二裂委陵菜總黃酮高、低劑量給藥28 d后平均攝食量明顯下降，平均飲水量明顯下降，平均排尿量明顯下降，體重明顯增加。說明矮生二裂委陵菜具有良好的降血糖作用，同時

6、改善糖尿病實驗動物的“三多一少”癥狀。
　　7、建立2型糖尿病實驗動物模型，以矮生二裂委陵菜總黃酮為實驗藥物，探究其抗2型糖尿病作用機制。結果表明，與模型組相比矮生二裂委陵菜總黃酮高、低劑量組給藥28 d后血清胰島素含量升高，胰島素抵抗指數下降；升高血清 SOD、降低血清丙二醛；同時降低血清總膽固醇、血清甘油三酯、血清低密度脂蛋白。說明矮生二裂委陵菜能夠促進胰島素分泌，提高機體對胰島素的敏感性和抗氧化能力，同時調節(jié)血脂水平。

7、>　　8、建立2型糖尿病實驗動物模型，以矮生二裂委陵菜總黃酮為實驗藥物，采用熒光半定量 RT-PCR技術，測定糖脂代謝關鍵激素和酶的 mRNA表達量，采用Livak法對相對表達量進行分析。結果表明，矮生二裂委陵菜總黃酮高、低劑量組顯著上調胰島素、葡萄糖激酶mRNA表達；顯著的下調葡萄糖-6-磷酸酶mRNA表達；極顯著的下調抵抗素、瘦素mRNA表達。說明矮生二裂委陵菜能夠調節(jié)多種糖脂代謝相關激素和酶的表達，達到抗2型糖尿病的目的。