德國小蠊抗藥性的生物學標志及快速生化檢測方法研究.pdf

1、德國小蠊可攜帶大量病原體，導致多種蟲媒傳染病的流行，對人體健康危害極大。長期大量不合理的濫用各種殺蟲劑，使得德國小蠊抗藥性問題日趨突出，抗藥性已成為制約德國小蠊化學防制效果的一個主要因素。目前病媒昆蟲抗藥性測定方法以生物測定法為主。實際應(yīng)用情況表明，現(xiàn)有的抗性檢測方法，無論是測定KT50還是測定LD50或LC50，都不適合早期抗性的檢測。因為當抗性被證實時，抗性頻率已經(jīng)很高。國內(nèi)外研究生化檢測方法代替生物測定法測定蚊、蠅抗藥性已取得一定

2、成效。若能找出德國小蠊抗藥性的生物學標志，進而建立德國小蠊抗藥性快速生化檢測方法，則可以提高抗性檢測的速度、靈敏度及準確度，對延緩抗性發(fā)展、減少殺蟲劑對環(huán)境的污染及制定合理有效的抗性治理措施都有重要的意義。 本研究以代謝抗性和靶標抗性產(chǎn)生的生化機制為基礎(chǔ)，研究不同殺蟲劑施用濃度、施藥周期、抗性水平與德國小蠊體內(nèi)相關(guān)酶活性的關(guān)系，從而分析哪些靶標酶和代謝酶可作為某種殺蟲劑抗藥性的生物學標志，建立德國小蠊抗藥性與生物學標志的相關(guān)方程

3、。 1.DDVP及高效氯氰菊酯施藥濃度對德國小蠊相關(guān)代謝酶活性的影響 1.1DDVP施藥濃度對德國小蠊相關(guān)代謝酶活性的影響。結(jié)果顯示堿性磷酸酯酶在DDVP施藥濃度≤0.004％時，其活性隨施藥濃度增加逐漸降低，但施藥組與對照組相比，無顯著性差異：隨DDVP施藥濃度增加，德國小蠊谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性受抑制程度逐漸增加，在DDVP施藥濃度為0.002％-0.004％之間時，施藥組與對照組相比，酶活性有顯著性差異；P450-

4、O脫甲基酶活性隨施藥濃度增加而降低，在DDVP施藥濃度為0.002％-0.004％時，施藥組與對照組相比，酶活性有顯著性差異。結(jié)果初步說明谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶和P450-O脫甲基酶是DDVP的主要代謝酶，而堿性磷酸酯酶是否是DDVP的代謝酶還需要進一步研究。 1.2高效氯氰菊酯施藥濃度對德國小蠊相關(guān)代謝酶活性的影響。結(jié)果顯示堿性磷酸酯酶活性在高效氯氰菊酯施藥濃度≤0.0004％，施藥組與對照組相比，差異無顯著性；谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶

5、活性隨施藥濃度增加而降低，在高效氰氰菊酯施藥濃度為0.0003％和0.0004％時，施藥組與對照組相比，酶活性有顯著性差異：P450-O脫甲基酶活性施藥濃度增加而降低，在高效氯氰菊酯施藥濃度為0.0002％-0.0004％時，施藥組與對照組相比，酶活性有顯著性差異。結(jié)果初步說明谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶和P450-O脫甲基酶可能是高效氯氰菊酯的主要代謝酶，而堿性磷酸酯酶是否是高效氯氰菊酯的主要代謝酶還有待進一步研究。 2.DDVP施藥周

6、期對德國小蠊相關(guān)代謝酶活性的影響 2.1DDVP施藥周期對堿性磷酸酯酶活性的影響。DDVP施藥周期在18天以下時，各施藥組堿性磷酸酯酶活性與對照組相比，差異無顯著性，進一步說明堿性磷酸酯酶可能不是DDVP的主要代謝酶。 2.2DDVP施藥周期對谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性的影響。施藥組谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性隨施藥周期的延長先下降后又慢慢回升。進一步說明谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶是DDVP的主要代謝酶。德國小蠊長期接觸低劑量DDVP導致

7、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性的回升可能是其對DDVP產(chǎn)生抗藥性的原因之一。 2.3DDVP施藥周期對P450-O脫甲基酶活性的影響。施藥組P450-O脫甲基酶活性與對照組相比，先升高后漸下降而后又逐漸回升。說明DDVP對德國小蠊P450O-脫甲基酶有誘導性，但誘導的時間很短。長期低劑量多次接觸DDVP是否會引起德國小蠊P450O-脫甲基酶活性持續(xù)增加，從而造成對殺蟲劑代謝增強而引起抗藥性還需要進一步研究。 3.德國小蠊抗藥性快

8、速生化檢測方法的研究 3.1德國小蠊DDVP不同抗性品系與相關(guān)靶標酶和代謝酶酶活性的關(guān)系 分析實驗室培育的DDVP不同抗性品系的德國小蠊抗性水平與相關(guān)靶標酶和代謝酶酶活性的關(guān)系，結(jié)果顯示DDVP不同抗性水平與AChE抑制率密切相關(guān)?？剐云废?-NA酯酶、酸性磷酸酯酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的活性與敏感品系相比，差異也存在有顯著性。提示AChE抑制率、1-NA酯酶、酸性磷酸酯酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性可以作為德國小蠊DDVP抗

9、性程度的生物學標志。在此基礎(chǔ)上，初步建立了DDVP抗性生物學標志與抗性系數(shù)的相關(guān)方程。 3.2德國小蠊高效氯氰菊酯不同抗性品系與相關(guān)靶標酶和代謝酶酶活性的關(guān)系 分析實驗室培育的高效氯氰菊酯不同抗性品系的德國小蠊抗性水平與相關(guān)靶標酶和代謝酶酶活性的關(guān)系，結(jié)果顯示高效氯氰菊酯不同抗性水平與AChE抑制率的差異有顯著性?？剐云废倒入赘孰腟-轉(zhuǎn)移酶活性與敏感品系相比，差異無顯著性。提示AChE抑制率可以作為德國小蠊高效氯氰菊酯抗