非綜合征型耳聾線粒體DNA突變及其臨床表型多樣性的研究.pdf

1、目的： 1．分析非綜合征型耳聾患者(nonsyndromic hearing loss，NSHL)及健康體檢者中3種線粒體DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)突變的發(fā)生頻率、性質(zhì)及臨床資料特點(diǎn)，探討線粒體DNA突變與非綜合征型耳聾的關(guān)系。 2．對mtDNA A1555G突變進(jìn)行定量研究，探討mtDNA A1555G突變的拷貝數(shù)與臨床表型之間的關(guān)系，進(jìn)一步闡明非綜合征型耳聾臨床表型多樣性的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)

2、。 方法： 1．應(yīng)用PCR-限制性酶切和測序?qū)?86例散發(fā)NSHL患者mtDNA Al555G、mtDNA A3243G、mtDNA A7445G三個(gè)位點(diǎn)的突變進(jìn)行檢測。收集七個(gè)mtDNA A1555G突變的耳聾家系。 2．建立RT-ARMS-qPCR系統(tǒng)對含突變型和野生型mtDNA 1555位點(diǎn)的片段的拷貝數(shù)進(jìn)行定量檢測。 3．結(jié)合散發(fā)組和家系組耳聾患者的臨床資料，統(tǒng)計(jì)分析mtDNA Al555G突變的

3、拷貝數(shù)與臨床表型多樣性的關(guān)系。 結(jié)果： 1．486例NSHL患者mtDNA Al555G突變陽性率為9.05％(44/486)，44例mtDNA Al555G突變中32例為同質(zhì)性突變，12例為異質(zhì)性突變；檢出1例mtDNA G7444A突變；所有樣本均未檢出mtDNA A3243G、mtDNA A7445G突變；100例健康體檢者中上述三個(gè)位點(diǎn)均未檢出突變。 2．共調(diào)查七個(gè)家系中的113人，男46人，女67人，年

4、齡3個(gè)月至82歲，耳聾患者28人。其中母系成員57人，耳聾患者26人，臨床癥狀從正常到極重度聾，因部分家系成員外出未能采集到血樣，有完整資料71人(母系成員52人，耳聾患者26人)。mtDNA Al555G突變52人，其中同質(zhì)性突變45人，異質(zhì)性突變7人。氨基糖甙抗生素是這些家系致聾的重要原因。 3．RT-ARMS-qPCR技術(shù)對含mtDNA點(diǎn)突變的DNA片段的定量檢測結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確。 4．散發(fā)組mtDNA Al555G

5、同質(zhì)性突變的拷貝數(shù)與耳聾輕重程度無關(guān)(R=0.001，P=0.997)：散發(fā)組mtDNA Al555G異質(zhì)性突變的拷貝數(shù)與耳聾輕重程度相關(guān)(R=0.771，P=0.003)，突變型的比例越高，耳聾程度越嚴(yán)重；家系組mtDNA Al555G同質(zhì)性突變的拷貝數(shù)與耳聾輕重程度相關(guān)(R=0.341，P=0.022)，突變型mtDNA Al555G拷貝數(shù)越高，耳聾程度越重；家系組mtDNA Al555G異質(zhì)性突變的拷貝數(shù)與耳聾輕重程度相關(guān) (R=

6、0.85，P=0.015)，突變的比例越高，耳聾程度越嚴(yán)重。 結(jié)論： 1．首次實(shí)驗(yàn)證實(shí)mtDNA A1555G的突變形式有同質(zhì)性和異質(zhì)性兩種：mtDNA Al555G是導(dǎo)致NSHL最常見的突變形式，與氨基糖甙抗生素致聾密切相關(guān)。mtDNA A3423G、 mtDNA A7445G在NSHL中突變率低。新發(fā)現(xiàn)了一個(gè)mtDNA G7444A突變的NSHL家系。 2．RT-ARMS-qPCR技術(shù)對定量檢測含mtDNA