陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)TIMP-3基因瞬時(shí)表達(dá)對(duì)兔血管平滑肌細(xì)胞增殖遷移及凋亡的影響.pdf

1、目的：通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)含有TIMP-3基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染體外兔血管平滑肌細(xì)胞，觀察瞬時(shí)表達(dá)的TIMP-3對(duì)細(xì)胞增殖、遷移及凋亡的影響，討論TIMP-3基因治療冠心病支架治療再狹窄(ISR)的前景。 方法：第一階段：構(gòu)建兔TIMP-3基因質(zhì)粒表達(dá)載體。按照正常對(duì)照組、空質(zhì)粒組、重組質(zhì)粒載體組將72孔兔血管平滑肌細(xì)胞分為3組，每組又分為24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)3個(gè)亞組，每個(gè)亞組n=8；陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染相應(yīng)組細(xì)胞，正常

2、對(duì)照組無(wú)質(zhì)粒加入。轉(zhuǎn)染后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)、描繪細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；ELISA法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP-2含量；RT-PCR分析細(xì)胞TIMP-3mRNA水平。第二階段：將24孔細(xì)胞分為3組進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，各組n=8。轉(zhuǎn)染后48小時(shí)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。第3階段：細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)在12個(gè)Transwell小室中進(jìn)行。將稀釋ECMgel等體積均勻涂于Transwell上室濾膜，成膠后分為3組進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，每組n=4。轉(zhuǎn)染后在下室中加

3、入等體積含高濃度血清細(xì)胞培養(yǎng)基，上室加入不含血清細(xì)胞培養(yǎng)基，溫育48小時(shí)后，HE染色，計(jì)算遷移至ECMgel和濾膜外表面的細(xì)胞數(shù)，每張濾膜隨機(jī)取5個(gè)視野。 結(jié)果：所有數(shù)據(jù)均通過(guò)．SSPSl2.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，以P<0.05認(rèn)為結(jié)果有意義。正常對(duì)照組細(xì)胞數(shù)、MMP-2含量、TIMP-3mRNA表達(dá)情況、細(xì)胞凋亡率、遷移細(xì)胞數(shù)與空質(zhì)粒組相比均無(wú)明顯差別；重組質(zhì)粒組細(xì)胞數(shù)、MMP-2含量、遷移細(xì)胞數(shù)與前兩者相比明顯減少，P<0.0