陽離子脂質(zhì)體介導TIMP-3基因瞬時表達對兔血管平滑肌細胞增殖遷移及凋亡的影響.pdf

1、目的：通過陽離子脂質(zhì)體介導含有TIMP-3基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染體外兔血管平滑肌細胞，觀察瞬時表達的TIMP-3對細胞增殖、遷移及凋亡的影響，討論TIMP-3基因治療冠心病支架治療再狹窄(ISR)的前景。 方法：第一階段：構(gòu)建兔TIMP-3基因質(zhì)粒表達載體。按照正常對照組、空質(zhì)粒組、重組質(zhì)粒載體組將72孔兔血管平滑肌細胞分為3組，每組又分為24小時、48小時、72小時3個亞組，每個亞組n=8；陽離子脂質(zhì)體介導質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染相應組細胞，正常

2、對照組無質(zhì)粒加入。轉(zhuǎn)染后24小時、48小時、72小時進行細胞計數(shù)、描繪細胞生長曲線；ELISA法測定細胞培養(yǎng)上清液中MMP-2含量；RT-PCR分析細胞TIMP-3mRNA水平。第二階段：將24孔細胞分為3組進行基因轉(zhuǎn)染，各組n=8。轉(zhuǎn)染后48小時檢測細胞凋亡率。第3階段：細胞遷移實驗在12個Transwell小室中進行。將稀釋ECMgel等體積均勻涂于Transwell上室濾膜，成膠后分為3組進行基因轉(zhuǎn)染，每組n=4。轉(zhuǎn)染后在下室中加

3、入等體積含高濃度血清細胞培養(yǎng)基，上室加入不含血清細胞培養(yǎng)基，溫育48小時后，HE染色，計算遷移至ECMgel和濾膜外表面的細胞數(shù)，每張濾膜隨機取5個視野。 結(jié)果：所有數(shù)據(jù)均通過．SSPSl2.0統(tǒng)計軟件進行分析，以P<0.05認為結(jié)果有意義。正常對照組細胞數(shù)、MMP-2含量、TIMP-3mRNA表達情況、細胞凋亡率、遷移細胞數(shù)與空質(zhì)粒組相比均無明顯差別；重組質(zhì)粒組細胞數(shù)、MMP-2含量、遷移細胞數(shù)與前兩者相比明顯減少，P<0.0