棗瘋病植原體基因組DNA分離和棗ERFs表達(dá)特性及功能預(yù)測(cè).pdf

1、棗（Ziziphus jujuba Mill.）屬鼠李科(Rhamnaceae)植物，是中國(guó)第一大干果樹種。棗樹的栽培過程中常伴隨著病蟲害的發(fā)生，其中最為嚴(yán)重的是植原體侵染引起的棗瘋病，堪稱棗樹的癌癥。為研究植原體與寄主棗樹的互作關(guān)系，嘗試分離了棗瘋病植原體基因組DNA。同時(shí)進(jìn)行了棗樹AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子基因的轉(zhuǎn)錄組表達(dá)差異分析，研究了ERF基因在棗樹抵抗植原體侵染過程中的可能作用。主要結(jié)果如下:
　　1.運(yùn)用差速離心結(jié)合脈沖電

2、泳分離棗瘋病植原體基因組DNA，結(jié)果在1600～2200Kb之間出現(xiàn)一條清晰明亮的條帶。PCR和RT-PCR均從回收的DNA溶液中檢測(cè)到了植原體DNA。
　　2.提取植原體侵染不同時(shí)期的棗葉片RNA，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，從轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中鑒定了93個(gè)棗AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子，93個(gè)棗樹AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子都含有保守AP2結(jié)構(gòu)域，不均勻的分布在棗樹的12條染色體上。
　　3.對(duì)棗樹中AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子基因在植原體侵入不同時(shí)期進(jìn)行

3、基因表達(dá)熱圖分析。結(jié)果顯示ZjERF04、ZjERF20、ZjERF21、ZjERF11、ZjERF18、ZjERF22、ZjERF28、ZjERF62、ZjERF72和ZjERF109等基因在棗樹發(fā)病期的表達(dá)量出現(xiàn)上調(diào)。對(duì)表達(dá)量上調(diào)的基因進(jìn)行熒光定量鑒定，表明從植原體開始入侵到棗樹發(fā)病的整個(gè)過程中ZjERF04、ZjERF20、ZjERF21、ZjERF11、ZjERF18、ZjERF22、ZjERF28和ZjERF62基因的表達(dá)量逐

4、漸升高。說明這幾個(gè)基因在棗樹抵御植原體侵染過程中可能發(fā)揮調(diào)控作用。
　　4.用水楊酸和茉莉酸甲酯處理?xiàng)椗吲嗝纾瑹晒舛縋CR檢測(cè)ZjERF04、ZjERF20、ZjERF21、ZjERF11、ZjERF18、ZjERF22、ZjERF28、ZjERF62、ZjERF72和ZjERF109基因在處理不同時(shí)間的棗苗中的表達(dá)量變化，結(jié)果表明10個(gè)基因在水楊酸處理2h后表達(dá)量都出現(xiàn)了升高，只有ZjERF04、ZjERF20、ZjERF21

5、、ZjERF22、ZjERF11和ZjERF62在茉莉酸甲酯處理2h或16h表達(dá)量出現(xiàn)升高，初步說明目的基因在棗樹響應(yīng)脅迫過程中起作用，但是參與調(diào)控的脅迫途徑不一樣。
　　5.獲得了轉(zhuǎn)ZjERF11基因的抗性芽10個(gè)，轉(zhuǎn)ZjERF18基因抗性芽15個(gè)。用H2O2處理ZjERF04、ZjERF11、ZjERF18基因瞬時(shí)表達(dá)的煙草葉片，結(jié)果顯示ZjERF04表達(dá)的葉片中CAT和SOD活性在0～12h都比對(duì)照高，這表明了ZjERF04