鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對缺血性腦卒中保護(hù)作用機(jī)制的實驗研究.pdf

1、目的：鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對高危個體進(jìn)行早期干預(yù)可能可以影響缺血性腦卒中的預(yù)后。在既往研究基礎(chǔ)上，我們擬預(yù)先使用鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯14日后，采用大腦中動脈線栓法制作大鼠局灶性腦缺血損傷模型，通過檢測MCAO大鼠腦組織的ET-1含量的變化、腦組織病理學(xué)改變、腦水腫程度、缺血側(cè)腦組織炎性浸潤情況，神經(jīng)細(xì)胞凋亡率變化以及相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)等來研究其發(fā)揮作用的可能生物學(xué)基礎(chǔ)。 研究方法：采用線栓法制備大腦中動脈梗塞大鼠模型。 (1)評價大腦中動

2、脈梗塞性大鼠腦缺血后行為障礙，應(yīng)用TTC染色、HE染色等病理技術(shù)研究鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對腦梗塞范圍、腦水腫程度及缺血組織病理形態(tài)、海馬CAl區(qū)神經(jīng)元密度的影響； (2)應(yīng)用real-time PCR、western blot等技術(shù)研究鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯干預(yù)對大鼠腦組織ET-1，ELISA法檢測TNF-α表達(dá)的影響，通過髓過氧化物酶活性分析鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯干預(yù)對腦缺血部位單核細(xì)胞活性的影響； (3)采用western blot技術(shù)分析MCAO大

3、鼠缺血側(cè)腦組織AQP4與AQP9表達(dá)量的變化和鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對其的影響； (4)采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法、流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠腦組織細(xì)胞凋亡率，westerblot檢測凋亡效應(yīng)蛋白表達(dá)，研究鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對大鼠局灶性腦缺血后細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：預(yù)先使用鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯14日， (1)可明顯改善MCAO大鼠行為學(xué)障礙，減輕腦水腫程度，減少腦缺血性損傷面積，改善局灶性腦缺血引起的海馬CAl區(qū)神經(jīng)元密度降低

4、； (2)從轉(zhuǎn)錄水平上抑制缺血性損傷引起的局部組織ET-1過度表達(dá)，改善與ET-1表達(dá)相關(guān)的TNF-a含量及單核細(xì)胞活化程度變化，抑制ET-1高度表達(dá)引起的局部炎癥反應(yīng)； (3)調(diào)節(jié)MCAO大鼠缺血側(cè)腦組織AQP4與AQP9蛋白表達(dá)量，改善局部組織水液代謝； (4)降低McAO大鼠Cleaved caspase 3和Cleared PARP蛋白表達(dá)量，抑制缺血性損傷引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。 結(jié)論：急性局部腦缺

5、血時突然發(fā)生的臟腑病變及功能失調(diào)、繼發(fā)于臟腑病變與局部組織環(huán)境急劇改變的應(yīng)激性自分泌、旁分泌因子如ET-1、TNF-a等類炎性／炎性細(xì)胞因子過度表達(dá)、局部活化的炎癥反應(yīng)，以及影響絡(luò)脈正常的生理功能的物質(zhì)如AQP4與AQP9等在病理狀態(tài)下的異常反應(yīng)，可能共同構(gòu)成了疾病急性發(fā)生過程中的風(fēng)、火、痰、熱、毒的基礎(chǔ)。鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯通過抑制ET-1、TNF-a表達(dá)及局部炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)局部水液代謝，影響caspase蛋白凋亡途徑，對抗缺血弓l起的神經(jīng)細(xì)胞