樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)胸腺上皮細(xì)胞系(MTEC-1)凋亡機(jī)制的體外研究.pdf

1、目的：體外研究證實(shí)樹突狀細(xì)胞可通過Notch受體與Jagged1配體轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號(hào)誘導(dǎo)胸腺上皮細(xì)胞系(mouse thymic epithelial cell line1，MTEC-1)凋亡，為治療嚴(yán)重感染、移植排斥反應(yīng)和腫瘤的放化療等原因所引起的胸腺萎縮導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能缺陷奠定基礎(chǔ)。
　　方法：分離骨髓細(xì)胞，體外采用GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)分化為骨髓來源的樹突狀細(xì)胞(bone marrow derived dendritic ce

2、ll，BMDC)，然后經(jīng)LPS刺激促進(jìn)其成熟，最后采用real-time PCR和流式細(xì)胞術(shù)分析BMDC的Jagged1表達(dá)水平;將成熟的BMDC與MTEC-1共培養(yǎng)，采用流式細(xì)胞術(shù)分析MTEC-1凋亡的變化，為進(jìn)一步驗(yàn)證Notch/Jagged1誘導(dǎo)胸腺上皮細(xì)胞凋亡，我們采用轉(zhuǎn)染Jagged1基因的成纖維細(xì)胞和重組Jagged1蛋白分別與MTEC-1共培養(yǎng)，再用流式細(xì)胞術(shù)檢測MTEC-1凋亡水平;最終應(yīng)用γ分泌酶抑制劑DAPT阻斷信號(hào)

3、途徑來驗(yàn)證Notch/Jagged1途徑是否參與DC誘導(dǎo)胸腺上皮細(xì)胞的凋亡。
　　結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)成熟的BMDC表面Notch配體Jagged1表達(dá)水平較不成熟的BMDC高;成熟的BMDC在體外與MTEC-1共培養(yǎng)后能明顯誘導(dǎo)MTEC-1的凋亡，進(jìn)一步利用Jagged1轉(zhuǎn)基因的成纖維細(xì)胞或重組Jagged1蛋白與MTEC-1共培養(yǎng)，同樣證實(shí)了Notch/Jagged1信號(hào)能介導(dǎo)MTEC-1的凋亡;在相同的共培養(yǎng)體系中加入DAPT阻止