錯(cuò)配修復(fù)基因hMLH1在雌激素誘導(dǎo)結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、背景與目的:
　　 結(jié)直腸癌(colorectalcancer，CRC)是很常見的惡性腫瘤，在西方發(fā)達(dá)國家其發(fā)病率已居惡性腫瘤的第2位，近幾年來我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率也逐年升高，甚至躍居第3位，尤其是在城市，有研究以HNPCC家族成員為研究對象認(rèn)為，對于患結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)，男性突變的攜帶者遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于女性突變攜帶者；大量的臨床和流行病學(xué)研究也證實(shí)雌激素有預(yù)防結(jié)直腸癌的效果，有研究認(rèn)為雌激素通過雌激素受體β（estrogenrecepto

2、rβ，ERβ）誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡可能是其機(jī)制之一[1]，但是細(xì)胞凋亡機(jī)制較為復(fù)雜，其具體機(jī)制還不是很清楚，研究發(fā)現(xiàn)錯(cuò)配修復(fù)基因參與多種DNA損傷介質(zhì)（順鉑、烷基化劑、5-氟尿嘧啶等）誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡[2-4]，但是對于錯(cuò)配修復(fù)基因是否參與雌激素誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制目前還沒有相關(guān)報(bào)道，本課題前期的研究發(fā)現(xiàn)雌激素能通過上調(diào)結(jié)直腸癌colo205細(xì)胞hMLH1基因的表達(dá)，從而增強(qiáng)錯(cuò)配修復(fù)功能[5]，因此，我們認(rèn)為雌激素對該基因的影

3、響可能是雌激素預(yù)防結(jié)直腸癌的機(jī)制之一，本研究旨在探討錯(cuò)配修復(fù)基因hMLH1在雌激素誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡中的作用。
　　 材料與方法：
　　 將含野生型hMLH1-cDNA的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入hMLH1缺陷的人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116中，用westernbloting實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染成功后在不同濃度的雌激素干預(yù)下，分別用流式細(xì)胞技術(shù)、活細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒、DAPI染色方法、westernbloting檢測凋亡蛋白等方法檢測轉(zhuǎn)染前

4、后細(xì)胞的凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 成功將pcmv-hMLH1及pcmv-sport6轉(zhuǎn)入HCT116細(xì)胞中，與空載組相比，hMLH1轉(zhuǎn)染后雌激素能誘導(dǎo)HCT116細(xì)胞活性顯著低于空載組，而凋亡率明顯．增加，DAPI染色結(jié)果顯示10-8雌二醇處理MLH1轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡顯著高于空載組，caspase3及caspase9檢測結(jié)果也提示MLH1陽性表達(dá)組與對照組相比明顯被激活裂解為小的有活性片段。
　　 結(jié)論：