完全人源化基因工程抗體anti-HBsAg Fab原核體系表達(dá)純化工藝路線放大可行性研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文完全人源化基因工程抗體antiHBsAgFab原核體系表達(dá)純化工藝路線放大可行性研究姓名：鄭大勇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：羅榮城20040526目的：13方法：摘要在搖瓶水平上對(duì)可影響大腸桿菌生長(zhǎng)及外源蛋白表達(dá)的因素進(jìn)行多因素分析，明確這些影響因素對(duì)菌體生長(zhǎng)及表達(dá)的影響程度。在BioFl0110型發(fā)酵罐中摸索高密度發(fā)酵方法，確定合理的發(fā)酵路線：探索具有可放大的、非特異性純化目的抗體片段的工藝路線。1

2、通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)及文獻(xiàn)回顧，確定出需實(shí)驗(yàn)考察的可能影響大腸桿菌生長(zhǎng)及外源蛋白表達(dá)的8個(gè)因素。采用PlaekeaBurman多因素兩水平分析法和BoxBehnken響應(yīng)面分析法對(duì)這8個(gè)因素進(jìn)行多因素交互作用的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨后按照設(shè)計(jì)要求在搖瓶水平上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：2在BioFloll0型發(fā)酵罐中考察不同的補(bǔ)料模式可能實(shí)現(xiàn)的發(fā)酵水平及蛋白表達(dá)水平?？疾?種補(bǔ)料模式：恒速補(bǔ)料、指數(shù)補(bǔ)料及溶氧反饋控制補(bǔ)料。3在純化路線設(shè)計(jì)方面，先以經(jīng)過(guò)Ni2敖合層柝的抗體為

3、“標(biāo)準(zhǔn)品”，摸索陽(yáng)離子交換柱和琉水層析柱的純化條件；隨后按照自行設(shè)計(jì)的組合層析策略，將獲得的菌體凍融上清經(jīng)預(yù)處理后按照弱陽(yáng)離子CM柱、疏水phenyl柱及凝膠過(guò)濾$200柱的順序依次純化：最后將得到的抗體以非競(jìng)爭(zhēng)性ELISA法測(cè)定與乙肝表面抗原的親和活性。結(jié)果：1在對(duì)影響基因工程重組菌Fab／pBAD／glllTOPl0生長(zhǎng)特性的多因素分析中，對(duì)可能影響菌體生長(zhǎng)的8因素兩水平分析后重要性排列的結(jié)果依次為：發(fā)酵起始pH、微量元素、體系載液