苦酸制甜法保護(hù)2型糖尿病胰島β細(xì)胞功能的作用及機(jī)制研究.pdf

1、糖尿病是慢性復(fù)雜性疾病，嚴(yán)重危害人類健康，積極開展糖尿病的防治工作已成為主要的社會公共衛(wèi)生問題。導(dǎo)師從事糖尿病醫(yī)療與科學(xué)研究近二十年，通過豐富的臨證經(jīng)驗(yàn)結(jié)合科研成果提煉出肥、糖、絡(luò)整體治療2型糖尿病的學(xué)術(shù)觀點(diǎn)，苦酸制甜是其重要的治療法則之一。本論文在導(dǎo)師指導(dǎo)下，首先對糖尿病相關(guān)的歷代文獻(xiàn)進(jìn)行了梳理，結(jié)合導(dǎo)師臨床經(jīng)驗(yàn)與辨治思維完成了苦酸制甜法的理論研究；其次運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)研究方法與技術(shù)從整體--細(xì)胞--分子三個層次開展了苦酸制甜法保護(hù)2型糖

2、尿病胰島細(xì)胞功能及機(jī)制的研究，以此探討了糖尿病中醫(yī)藥防治理論和導(dǎo)師臨床經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)內(nèi)涵。 一、理論研究 1 歷代醫(yī)家著述對糖尿病的中醫(yī)藥治療學(xué)具有指導(dǎo)意義 通過對中醫(yī)學(xué)有關(guān)消渴(病)的認(rèn)識歷代文獻(xiàn)梳理，可以看出，中醫(yī)學(xué)對消渴(病)的認(rèn)識源于春秋戰(zhàn)國時期，發(fā)展于唐宋，成熟于明清。其中三消論的提出具有重要的意義，標(biāo)志著消渴(病)辨治體系的形成。尤其是“陰虛為本，燥熱為標(biāo)”的消渴病機(jī)認(rèn)識對后世辨治消渴及糖尿病具有重要的指

3、導(dǎo)意義?！瓣幪摓楸?，燥熱為標(biāo)”是古人認(rèn)識三消論的一種觀點(diǎn)，它的提出在當(dāng)時是有先進(jìn)意義的，其已認(rèn)識到消渴(病)的復(fù)雜性，并正確認(rèn)識到發(fā)展至中后期消渴的病機(jī)本質(zhì)。推動了中醫(yī)辨治消渴病的發(fā)展。但以此辨治糖尿病存在著一定的局限性，其因有三：l糖尿病不完全等同于消渴病；2“陰虛為本，燥熱為標(biāo)”不能囊括消渴(病)早期的病機(jī)變化；3古今生活環(huán)境、飲食習(xí)慣、疾病譜等發(fā)生了巨大改變，需要探索新的治療方法完善糖尿病的中醫(yī)治療學(xué)。 2 導(dǎo)師應(yīng)用苦酸制

4、甜法治療糖尿病的學(xué)術(shù)經(jīng) 驗(yàn)苦酸制甜法是導(dǎo)師肥、糖、絡(luò)整體辨治2型糖尿病治療法則的重要治法之一。導(dǎo)師通過對2型糖尿病與消渴異同的思考發(fā)現(xiàn)，糖尿病以血糖升高為診斷依據(jù)，為生物化學(xué)診斷，消渴(病)以癥狀為診斷依據(jù)，具有典型“三多一少”癥狀的糖尿病應(yīng)按消渴(病)辨治，然而隨著疾病譜、癥狀譜的變化，對2型糖尿病尤其是肥胖者的因機(jī)證治應(yīng)重新思考。導(dǎo)師認(rèn)為2型糖尿病，尤其是肥胖2型糖尿病其病機(jī)以郁熱為常見，其病機(jī)隨病程遷延而演變，常由實(shí)熱轉(zhuǎn)為

5、虛熱，而苦能瀉熱，酸能輔佐苦瀉熱，故針對2型糖尿病病機(jī)擬苦酸相伍以制甜?？嗨嶂铺鸱▎⒃从趯?dǎo)師對臨證經(jīng)驗(yàn)的提煉，同時苦酸制甜法在導(dǎo)師通過對糖尿病相關(guān)中醫(yī)古籍文獻(xiàn)的思考與反復(fù)的臨床驗(yàn)證中逐漸得以完善。導(dǎo)師受自然中苦味是甜味的對立，酸味是甜味的綜合的現(xiàn)象啟發(fā)，又《素問·至真要大論》日：“辛甘發(fā)散為陽，酸苦涌泄為陰”，酸味、苦味屬陰，甘味屬陽，而糖尿病的典型癥狀尿甜屬甘味，以苦味、酸味之陰調(diào)甘味之陽，以達(dá)“陰平陽秘，精神乃治”。苦酸制甜法是導(dǎo)師

6、將臨證經(jīng)驗(yàn)和中醫(yī)藥傳統(tǒng)理論--四氣五味藥性理論及陰陽理論相結(jié)合而提出。法立則方出，具體選方可遵循以下四點(diǎn)：1辨病程定主方；2辨證素定主方；3辨肥胖定主方，兼顧血脂與血壓；4苦味酸味不拘于方證--中藥藥理學(xué)的啟示。選方多為連梅湯、烏梅丸等經(jīng)方或名方。但劑量配伍及藥味配伍有異于原方。苦酸制甜法適合于肥胖2型糖尿病及失眠、煩躁、盜汗等存在血糖難控因素者。糖尿病是復(fù)雜性疾病，病程遷延，其病因病機(jī)非單一所能囊括，應(yīng)適當(dāng)調(diào)整藥味的配伍，另苦酸制甜法

7、如長時間應(yīng)用為避免苦寒藥傷胃氣，可選擇辛、甘味的佐制。 通過對歷代醫(yī)家有關(guān)消渴(病)著述的學(xué)習(xí)，筆者深感中醫(yī)學(xué)認(rèn)識疾病、辨治疾病具有先進(jìn)性，諸多醫(yī)家辨治消渴(病)的經(jīng)驗(yàn)對豐富、完善糖尿病的中醫(yī)辨治方法具有重要的參考價值。2型糖尿病不完全等同于古代消渴(病)，因此需要針對其病因病機(jī)積極的探索新的治療方法，導(dǎo)師著眼于2型糖尿病多郁熱的病機(jī)，提出苦酸制甜法，是對2型糖尿病中醫(yī)辨治理論的探索，力爭完善和補(bǔ)充糖尿病中醫(yī)治療學(xué)。 二

8、、實(shí)驗(yàn)研究 導(dǎo)師課題組先后開展了肥、糖、絡(luò)整體治療2型糖尿病的臨床與實(shí)驗(yàn)研究，其中課題組發(fā)現(xiàn)苦酸制甜法可以降低導(dǎo)師門診肥胖2型糖尿病初診患者血糖水平。為進(jìn)一步驗(yàn)證苦酸制甜法的療效，探討其機(jī)理本課題開展了系列實(shí)驗(yàn)研究。以模擬2型糖尿病大鼠和高糖培養(yǎng)的BTc3細(xì)胞系為載體，采用OGTT、IVGTT、免疫組化、實(shí)時熒光定量PCR、激光共聚焦、TUNEL 等多種技術(shù)方法，對苦酸制甜法保護(hù)2型糖尿病胰島細(xì)胞功能和機(jī)制進(jìn)行了系列研究，初步結(jié)

9、果如下： 1 建立模擬2型糖尿病大鼠模型，其尚存一部分胰島細(xì)胞功能，為動態(tài)觀察2型糖尿病藥物療效和機(jī)制研究提供了可選擇的動物模型。 2 苦酸制甜法可以調(diào)整模擬2型糖尿病大鼠的糖代謝，OGTT、IVGTT、糖化血清蛋白實(shí)驗(yàn)檢測均支持上述結(jié)果，并且IVGTT 實(shí)驗(yàn)表明苦酸制甜法可以保護(hù)模擬2型糖尿病大鼠胰島細(xì)胞功能。 3 糖毒性是胰島細(xì)胞功能損傷的重要原因之一，免疫組化的方法表明苦酸制甜法可以增加B細(xì)胞數(shù)量、使胰島細(xì)

10、胞GLUT2表達(dá)增多，提示苦酸制甜法保護(hù)模擬2型糖尿病大鼠胰島細(xì)胞功能可能與其改善糖毒性有關(guān)。 4 苦酸制甜法對高糖培養(yǎng)的BTc3細(xì)胞胰島素分泌情況的影響表明該法可以減輕糖毒性，有助于恢復(fù)高糖抑制的BTc3細(xì)胞胰島素分泌。 5 苦酸制甜法保護(hù)胰島細(xì)胞功能可能的分子機(jī)制在于提高PDX-1、GCKmRNA的表達(dá)，而PDX—1、GCK基因表達(dá)的減少在糖毒性胰島細(xì)胞功能缺陷中起著至關(guān)重要的作用。PDX-1是胰島素基因最重要的轉(zhuǎn)錄

11、激活因子，同時也是葡萄糖激酶(GK)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體2(GLUT2)等與胰島素釋放有關(guān)的一組基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。長期高血糖抑制PDX-1的表達(dá)及其與TATA盒和hUPE3的結(jié)合，也就抑制了GLUT2和GK基因的表達(dá)，使B細(xì)胞內(nèi)GLUT2和GK的mRNA水平下降，GLUT2和GK的合成減少，胰島素釋放減少，研究結(jié)果初步表明苦酸制甜方可以提高高糖抑制的PDX-1、GCK mRNA的表達(dá)，因此推測苦酸制甜法通過減輕糖毒性，保護(hù)胰島細(xì)胞功能。

12、 上述實(shí)驗(yàn)初步探討了苦酸制甜法的療效及可能的機(jī)制，為課題組進(jìn)一步研究苦酸制甜法奠定了基礎(chǔ)，提供了方向。同時實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的方法和技術(shù)為相關(guān)研究工作提供了一定的參考。 三、本研究特色和創(chuàng)新之處 1 文獻(xiàn)研究中，苦酸制甜法是導(dǎo)師集多年臨證經(jīng)驗(yàn)，對2型糖尿病的病因病機(jī)進(jìn)行梳理，基于四氣五味藥性理論和中醫(yī)陰陽理論提出的糖尿病中醫(yī)治法，本研究首次系統(tǒng)對導(dǎo)師苦酸制甜法的臨證應(yīng)用進(jìn)行分析，總結(jié)導(dǎo)師應(yīng)用苦酸制甜法治療糖尿病的辨治規(guī)律，為糖

13、尿病臨床治療提供了新思路。 2 實(shí)驗(yàn)研究中，以高脂加STZ誘導(dǎo)的模擬實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠、高糖培養(yǎng)的βTc3細(xì)胞為模型，從調(diào)控糖代謝的整體效應(yīng)、胰島細(xì)胞功能、β細(xì)胞數(shù)、βTc3細(xì)胞胰島素分泌、葡萄糖激酶(GCK)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)、胰腺十二指腸同源異型盒(PDx—1)表達(dá)等角度，從整體--細(xì)胞--分子不同層次深入探討了苦酸制甜法保護(hù)胰島細(xì)胞功能，治療2型糖尿病的科學(xué)性，國內(nèi)外文獻(xiàn)未見同類報道。 3 理論創(chuàng)新