C3與遲發(fā)型超敏反應及C3和MBL對巨噬細胞吞噬活性的影響.pdf

1、補體系統(tǒng)是天然免疫的重要組成部分，由30余種可溶性蛋白和膜結(jié)合蛋白組成，具有調(diào)理和溶解微生物、趨化和過敏毒素、清除免疫復合物等生物學功能。補體成分3(C3)是補體系統(tǒng)的中樞，補體激活的3條途徑即經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑都要通過激活C3才得以實現(xiàn)。C3可能是補體系統(tǒng)中功能最多的分子，它能與20余種蛋白質(zhì)相互作用，產(chǎn)生多種功能。近年來在C3基因敲除(C3-/-)小鼠的研究提示，C3可以觸發(fā)和調(diào)節(jié)獲得性免疫，形成了天然免疫和獲得性免疫之

2、間的橋梁。然而，C3在細胞免疫或DTH反應中的作用究竟如何，作用有多大，還不很清楚。 甘露聚糖結(jié)合凝集素(MBL)系C型凝集素超級家族中膠凝素家族成員，是天然免疫系統(tǒng)中的關鍵分子。它可選擇性識別多種病原體表面的糖結(jié)構(gòu)，以不依賴抗體和C1q的方式激活補體系統(tǒng)，發(fā)揮溶破和間接調(diào)理功能，還能與吞噬細胞表面膠凝素受體結(jié)合而起直接調(diào)理作用。但是，在調(diào)理吞噬中，補體系統(tǒng)的作用、MBL的直接調(diào)理作用究竟有多大?目前尚無明確的結(jié)論。 因

3、此，本研究用卵白蛋白(OVA)在C3基因敲除小鼠及野生型小鼠誘導足墊的DTH反應，探索C3在DTH中的可能作用；分別用C3-/-小鼠和C3+/+小鼠的血清處理各種病原體，并用抗MBL多克隆抗體處理血清，探索C3和MBL對巨噬細胞體外吞噬功能的影響。 目的: 1.在C3-/-和C3+/+小鼠(C57BL/6)誘導DTH，探索C3在DTH中的作用。 2.研究MBL體外結(jié)合微生物的能力，探索C3和MBL對巨噬細胞吞噬功

4、能的影響。 方法: 1.用OVA誘導小鼠足墊部位的DTH，測量小鼠足墊厚度的變化，并對反應部位的組織進行H&E和免疫組化染色檢查；分離小鼠脾臟T淋巴細胞，用巨噬細胞作為抗原提呈細胞，在體外分別用絲裂原和特異性抗原刺激后，用3H-胸腺嘧啶核苷摻入法評價T淋巴細胞的增殖活性。 2.用ELISA分析幾種病原體結(jié)合MBL的能力，誘導并分離小鼠腹腔巨噬細胞，用C3-/-小鼠和C3+/+小鼠血清及抗MBL多克隆抗體處理微生物

5、，然后與巨噬細胞相互作用，觀察小鼠巨噬細胞的吞噬率和吞噬指數(shù)的變化。 結(jié)論: 1.C3缺陷顯著地影響了DTH反應、單個核細胞浸潤和體外T淋巴細胞對特異性抗原再次應答增殖反應的程度，這提示C3在DTH反應中起了重要作用。 2.C3缺陷和用抗體阻斷MBL的作用使巨噬細胞的吞噬能力降低，C3缺陷的效應最明顯；MBL對巨噬細胞吞噬不同病原體的影響大小不一。資料表明，C3和MBL均參與了對病原體的調(diào)理吞噬，但前者的作用較大