不同成分的門靜脈血供對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、【目的】
　　1、建立操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定可靠、重復(fù)性好的大鼠門靜脈動(dòng)脈化模型(完全門靜脈動(dòng)脈化及部分門靜脈動(dòng)脈化)。
　　2、探討大鼠門靜脈接受不同血供(完全門靜脈血、門靜脈血及動(dòng)脈血、完全動(dòng)脈血)時(shí)對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的影響。
　　【方法】
　　實(shí)驗(yàn)一大鼠模型的建立與觀察:
　　1.1完全門靜脈動(dòng)脈化(CPVA)模型:使用“”型同種異體血管材料(上端套袖套,下端結(jié)扎,側(cè)端曠置),以套入式縫合及袖套法建立大鼠模

2、型。切除左腎,將左腎動(dòng)脈與門靜脈殘端借同種異體血管材料連接,左腎靜脈借袖套與腸系膜上靜脈連接。
　　1.2部分門靜脈動(dòng)脈化(PPVA)模型:采用“”型同種異體血管材料(上、下端套袖套,側(cè)端曠置),以套入式縫合及袖套法建立大鼠模型。切除左腎,將左腎動(dòng)脈與門靜脈殘端、腸系膜上靜脈借同種異體血管材料連接。
　　1.3觀察:70例SD大鼠隨機(jī)分成3組,完全門靜脈動(dòng)脈化組30只、部分門靜脈動(dòng)脈化組30只與對(duì)照組(僅切除左腎及游離門靜脈

3、第1屬支)10只。分析3組手術(shù)時(shí)間、出血量、門靜脈阻斷時(shí)間及存活率。
　　實(shí)驗(yàn)二探討大鼠門靜脈接受不同血供時(shí)對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的影響:
　　108例SD大鼠隨機(jī)分成CPVA組36只,PPVA組36只與對(duì)照組36只。術(shù)中確保第一肝門阻斷時(shí)間為25min,以誘導(dǎo)近似相同程度的肝臟缺血再灌注損傷。術(shù)后2h,6h,1d,3d,7d隨機(jī)抽取6只大鼠有創(chuàng)監(jiān)測(cè)門靜脈壓力,并觀察肝臟功能(外周血ALT、AST),血清一氧化碳(NO),血漿

4、ET-1變化,肝臟病理改變,及檢測(cè)肝組織p38MAPK磷酸化水平。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,多組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析及析因分析,進(jìn)一步兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)法;動(dòng)物生存時(shí)間采用累積生存曲線;率的比較采用χ2檢驗(yàn)或者Fisher精確概率法檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　【結(jié)果】
　　實(shí)驗(yàn)一大鼠模型的建立與觀察:
　　兩種模型均

5、造模成功。CPVA模型成功率96.7％(29/30),手術(shù)時(shí)間為(53±3.95)min,出血量約為1.1±0.4ml,門靜脈阻斷時(shí)間為(12.5±1.5)min。PPVA模型成功率100%(30/30),手術(shù)時(shí)間為(49.5±3.0)min,出血量約為0.97±0.33ml,門靜脈阻斷時(shí)間為(15.2±1.8)min。對(duì)照組成功率100%(30/30),手術(shù)時(shí)間為(23.9±1.85)min,出血量約為0.25±0.13ml,門靜脈不

6、需要阻斷。
　　與CPVA組相比,PPVA組術(shù)中出血量及術(shù)后7d累計(jì)生存率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),PPVA組手術(shù)時(shí)間要短,但門靜脈阻斷時(shí)間要長(zhǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　實(shí)驗(yàn)二大鼠門靜脈接受不同血供時(shí)對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的影響:
　　2.1門靜脈壓力:CPVA組及PPVA組術(shù)后5個(gè)時(shí)間點(diǎn)門靜脈壓力與對(duì)照組比均明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PPVA組術(shù)后2h門靜脈壓力與CPVA組比明

7、顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.2血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)含量比較:CPVA組及PPVA組術(shù)后2h、6h、1d、3d的血清ALT、AST值與對(duì)照組比明顯下降。PPVA組術(shù)后2h、6h、1d、3d的血清ALT值及術(shù)后2h、6h的血清AST值與CPVA組比顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.3血清NO:CPVA組及PPVA組術(shù)后2h、6h、1d的血清NO值與對(duì)照組比明顯

8、下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PPVA組術(shù)后2h、6h、1d的血清NO值與CPVA組比較均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.4血漿ET-1:CPVA組及PPVA組術(shù)后2h、6h的血漿ET-1值與對(duì)照組比較明顯下降,且PPVA組在術(shù)后1d的血漿ET-1值與其相比仍有降低,而CPVA組術(shù)后7d的血漿ET-1值與其比更高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PPVA組術(shù)后2h、6h、1d、7d的血漿ET-1值

9、與CPVA組比較均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.5肝臟病理HE結(jié)果:對(duì)照組缺血再灌注損傷最嚴(yán)重,恢復(fù)最慢,可見(jiàn)大量肝細(xì)胞排列紊亂、明顯水腫、呈空泡變性,肝竇少量淤血伴大量中性粒細(xì)胞滲出及枯否細(xì)胞聚集,肝小葉結(jié)構(gòu)不清,有少量液化壞死灶。CPVA組可見(jiàn)肝細(xì)胞輕微水腫,少量肝細(xì)胞呈空泡變性,肝竇輕微淤血,并可見(jiàn)中性粒細(xì)胞滲出及枯否細(xì)胞聚集,肝小葉結(jié)構(gòu)不清?？梢?jiàn)肝細(xì)胞片狀液化性壞死。PPVA組缺血再灌注損傷最輕,恢

10、復(fù)最快,肝小葉、中央靜脈、匯管區(qū)結(jié)構(gòu)清晰,肝細(xì)胞索排列整齊,少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);肝竇結(jié)構(gòu)規(guī)則,肝竇內(nèi)皮細(xì)胞無(wú)明顯腫脹變形,有輕度淤血。偶見(jiàn)肝細(xì)胞片狀液化性壞死。
　　2.6肝臟組織p38蛋白表達(dá):CPVA組和PPVA組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)pp38蛋白表達(dá)量呈現(xiàn)先增加后減少趨勢(shì),其中表達(dá)高峰出現(xiàn)在術(shù)后6h。對(duì)照組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)pp38蛋白表達(dá)量呈現(xiàn)遞減趨勢(shì),術(shù)后1d后幾乎不表達(dá)。三組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)p38蛋白表達(dá)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。術(shù)后6h,CPVA組和PP