c-fos和MMP-9在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病中的作用研究.pdf

1、研究背景:子宮內(nèi)膜異位癥是一種主要發(fā)生在育齡期婦女的常見婦科疾病，它表現(xiàn)出來(lái)的盆腔疼痛和不孕等臨床癥狀已經(jīng)嚴(yán)重影響了現(xiàn)代女性的身心健康，因此近年來(lái)日益受到眾多研究者的廣泛關(guān)注。子宮內(nèi)膜異位癥在普通人群中的發(fā)病率為10％-15％。目前其確切的病因和病理機(jī)制仍不清楚，但經(jīng)典的病因?qū)W說(shuō)有內(nèi)膜種植學(xué)說(shuō)、體腔上皮化生學(xué)說(shuō)、淋巴回流學(xué)說(shuō)、免疫學(xué)說(shuō)等，近年來(lái)認(rèn)為遺傳因素、環(huán)境因素也同樣影響了子宮內(nèi)膜異位癥的易感性。子宮內(nèi)膜異位癥雖是一種良性疾病，但卻

2、表現(xiàn)出與惡性腫瘤相似的生物學(xué)特性，如細(xì)胞的非典型性增生、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、新生血管形成及遺傳的不穩(wěn)定性等。其中，子宮內(nèi)膜的異位侵襲是內(nèi)異癥的重要特點(diǎn)?？梢酝普摚恍┰谀[瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用的分子可能在子宮內(nèi)膜的異位侵襲中也有著相似的作用。在過(guò)去幾年中，有研究探討了金屬基質(zhì)蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)等腫瘤侵襲促進(jìn)因子在內(nèi)異癥發(fā)病中的作用，這些研究常著重于MMPs等降解細(xì)胞外基質(zhì)的效應(yīng)分子，而這些分

3、子的上游水平存在哪些調(diào)控因子，及其與這些因子相互作用的研究卻比較少見。 c-fos是一種雌激素即刻早期基因，可對(duì)雌激素作用發(fā)生早期應(yīng)答。近年有研究證實(shí)c-fos可通過(guò)調(diào)節(jié)MMPs的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)。MMP-9是降解細(xì)胞外基質(zhì)的重要酶類，它不僅促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程，同時(shí)在內(nèi)異癥的發(fā)病中也發(fā)揮了重要作用。值得一提的是，在MMP-9基因啟動(dòng)子上游存在轉(zhuǎn)錄因子AP-1的結(jié)合位點(diǎn)，提示作為轉(zhuǎn)錄因子AP-1重要構(gòu)成亞單位的c—fos蛋

4、白可參與調(diào)節(jié)MMP-9基因的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。已有研究顯示c-fos通過(guò)調(diào)節(jié)MMP-9表達(dá)水平而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲。正因?yàn)樽訉m內(nèi)膜異位癥與腫瘤有著諸多的相似之處，我們?cè)O(shè)想，c-fos和MMP-9是否在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病中有著類似的作用呢? 目前國(guó)內(nèi)外尚未有研究探討c-fos基因在人子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病中的作用，該研究在國(guó)際上首次于人類體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)中探討了c-fos在內(nèi)異癥發(fā)生發(fā)展中的作用，并首次將c-fos與細(xì)胞外基質(zhì)降解因子

5、MMP-9及異位子宮內(nèi)膜賴以生存的雌激素聯(lián)系起來(lái)，從疾病誘因到信號(hào)整合分子再到效應(yīng)分子的整體角度分析了三者在子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵襲中的作用。同時(shí)，該研究在國(guó)內(nèi)首先將Boyden侵襲小室應(yīng)用于子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵襲的研究，為探討內(nèi)異癥的發(fā)病機(jī)理提供了新的方法和途徑。我們首先檢測(cè)了c-fos及MMP-9蛋白在正常子宮內(nèi)膜以及內(nèi)異癥患者在位和異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)，分析c-fos蛋白表達(dá)與MMP-9蛋白表達(dá)及患者血清雌激素水平的相關(guān)性，然后在體外實(shí)驗(yàn)中研究

6、了雌激素、c-fos及MMP-9在子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵襲中的作用以及它們之間的相互關(guān)系，以期探討子宮內(nèi)膜異位癥的病理發(fā)生機(jī)制并試圖找到一種治療子宮內(nèi)膜異位癥的新途徑。 第一部分c-fos、MMP-9在子宮內(nèi)膜異位癥患者在位和異位子宮內(nèi)膜以及正常人子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) 目的：通過(guò)檢測(cè)c-fos、MMP-9在子宮內(nèi)膜異位癥患者及正常人子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，分析它們之間以及和血清雌激素水平的相關(guān)性，探討c-fos、MMP-9在子宮內(nèi)

7、膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的作用。 材料與方法：收集子宮內(nèi)膜異位癥患者(以下簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥)配對(duì)在位及異位內(nèi)膜25例(增生期14例、分泌期11例)，正常人子宮內(nèi)膜30例(增生期17例、分泌期13例)，同時(shí)獲取患者血清。采用免疫組織化學(xué)法對(duì)c-fos蛋白表達(dá)定位，蛋白免疫印跡(Western blotting)檢測(cè)上述三組子宮內(nèi)膜組織中c-fos及MMP-9蛋白表達(dá)水平，電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)血清雌二醇水平。 結(jié)果：c-fos蛋白主要定位于

8、子宮內(nèi)膜細(xì)胞核；相對(duì)于正常人子宮內(nèi)膜，c-fos及MMP-9在內(nèi)異癥患者在位及異位內(nèi)膜的蛋白水平較高：而它們?cè)趦?nèi)異癥患者在位及異位內(nèi)膜之間的表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異；三組內(nèi)膜組織都顯示c-fos表達(dá)在增生期高于分泌期，僅正常內(nèi)膜顯示MMP-9蛋白表達(dá)增生期高于分泌期；c-fos與MMP-9蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，并且增生期正常人內(nèi)膜及異位癥患者在位內(nèi)膜c-fos表達(dá)與血清雌二醇水平呈正相關(guān)。結(jié)論：c-fos及MMP-9在內(nèi)異癥患者在位和異位內(nèi)膜組

9、織的異常表達(dá)可能參與了子宮內(nèi)膜異位癥的病理發(fā)生與發(fā)展。 第二部分 Boyden侵襲小室在子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵襲研究中的作用 目的：探討B(tài)oyden侵襲小室在子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵襲研究中的作用。 材料與方法：收集非內(nèi)異癥良性疾病行子宮切除的患者子宮內(nèi)膜，分離培養(yǎng)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞。Boyden侵襲小室觀察雌激素及其受體阻斷劑對(duì)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞侵襲力的作用。 結(jié)果：各組細(xì)胞都發(fā)生侵襲。雌激素作用組子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞侵襲數(shù)目較

10、對(duì)照組增多，而雌激素受體阻斷劑或與雌激素共同作用組細(xì)胞侵襲數(shù)目與對(duì)照組無(wú)顯著差異。 結(jié)論：Boyden侵襲小室實(shí)驗(yàn)與內(nèi)異癥雌激素依賴性的臨床表現(xiàn)及子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞上存在雌激素受體的基礎(chǔ)研究一致，提示它是研究子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵襲現(xiàn)象的有力模型，為探索子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制提供新的方法和途徑。 第三部分 c-fos;MMP-9在雌激素促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵襲中的作用 目的：探討c-fos、MMP-9在雌激素促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵

11、襲中的作用材料與方法：收集非內(nèi)異癥良性疾病行子宮切除的患者子宮內(nèi)膜，分離培養(yǎng)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞；觀察雌激素及其受體阻斷劑對(duì)基質(zhì)細(xì)胞c-fos、MMP-9蛋白表達(dá)水平的影響；采用siRNA分別干擾基質(zhì)細(xì)胞c-fos、MMP-9的表達(dá)，結(jié)合Boyden侵襲小室觀察c-fos、MMP-9基因沉默的基質(zhì)細(xì)胞在雌激素作用下侵襲力的改變，同時(shí)觀察c-fos基因沉默基質(zhì)細(xì)胞在雌激素作用下MMP-9蛋白表達(dá)水平的改變。結(jié)果：①雌激素作用于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞

12、使c-fos、MMP-9表達(dá)水平上升，但雌激素受體阻斷劑可抑制此現(xiàn)象；②對(duì)照組、雌激素組、雌激素作用的siRNA干擾組細(xì)胞均發(fā)生侵襲，雌激素作用組細(xì)胞侵襲數(shù)目最多，c-fos或MMP-9siRNA干擾的細(xì)胞在雌激素作用下侵襲數(shù)目較雌激素組減少，但仍多于對(duì)照組；③c-fos siRNA干擾的細(xì)胞在雌激素作用下MMP-9蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組無(wú)顯著差異。 結(jié)論：①雌激素以受體依賴性方式作用于c-fos，繼而引發(fā)MMP-9基因表達(dá)增強(qiáng)，