南方大口鲇和中華倒刺鲃抗菌相關(guān)蛋白的研究.pdf

1、隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的繁榮，水環(huán)境污染加劇，魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖頻頻發(fā)生各種疾病(細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng))，制約了漁業(yè)的發(fā)展，防治過(guò)程中大量地使用的抗生素和化學(xué)藥物，對(duì)魚(yú)類(lèi)品質(zhì)又帶來(lái)負(fù)面影響，而且嚴(yán)重危害消費(fèi)者的健康。為了提高漁業(yè)的生產(chǎn)能力，生產(chǎn)健康綠色魚(yú)類(lèi)食品，研究開(kāi)發(fā)魚(yú)類(lèi)天然的新型的抗病藥物顯得十分必要。 生物抗菌蛋白是一類(lèi)具有抗菌活性的蛋白質(zhì)，廣泛存在于生物界，在機(jī)體抵抗病原菌的入侵方面起著重要的作用，被認(rèn)為是缺乏特異性免疫功能生物的重要防御成

2、分。大口鲇和中華倒刺嗇巴生長(zhǎng)快產(chǎn)量高，肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，消費(fèi)市場(chǎng)廣闊，因此研究清楚大口鲇和中華倒刺鲃的抗菌蛋白和抗病機(jī)制可以給漁業(yè)帶來(lái)巨大的市場(chǎng)利益。 從成都通威水產(chǎn)科技有限公司取幾條南方大口鲇(Silurus meridionalis)和中華倒刺鲃(Spinibarbus sinensis)。 為更廣泛地研究抗菌相關(guān)蛋白，先采用三種抽提體系分別研究了健康大口鲇和患病大口鲇的皮膚分泌液和各個(gè)組織抽提樣品里抗菌因子的抗菌

3、活性及其理化性質(zhì)，再研究了大口鲇和中華倒刺鲃的血清凝集素。 用抽提體系Ⅰ"0.1％TritonX-100+0.2％NaAc+1mmol/L PMSF"和抽提體系Ⅱ"0.1％TFA+50％乙孵+1mmol/L PMSF"研究了健康南方大口鲇皮膚分泌液、皮膚、胃、腸、肝臟和腎的抗菌因子，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用抽提體系Ⅱ抽提得到的皮膚分泌液樣品的抗菌活性最強(qiáng)。它列具有廣譜的抗菌活性，對(duì)G細(xì)菌 (枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、金黃包葡萄菌A309、糞鏈

4、球菌)和G細(xì)菌(大腸桿菌、綠膿桿菌)都有較強(qiáng)的抗菌活性；經(jīng)胃蛋白酶在37℃下作用30min后，該抗菌因子的抗菌活性丟失；該抗菌蛋白在pH6.0和7.0時(shí)抗菌活性穩(wěn)定，pH5.0或8.0時(shí)抗菌活性減弱了一些；將其煮沸10min后離心，上清的抗菌活性依然很穩(wěn)定；采用20％～50％硫酸銨飽和度梯度對(duì)該抗菌因子進(jìn)行了一定程度的純化。采用抽提體系Ⅲ"10 mmol/L HEPES+112 mmol/L NaCl+3.4 mmol/L KCI+2.

5、4 mmol/L NaHCO<,3>，pH 7.4"初步研究了一條患病大口鲇的的皮膚、腎、肝中抗菌因子的抗菌活性和蛋白質(zhì)組成。因?yàn)槟厥囚~(yú)類(lèi)主要的抗菌相關(guān)因子，所以著重研究了健康大口鲇和中華倒刺鲃血清中的天然凝集素。為進(jìn)一步的基因研究奠定了基礎(chǔ)從大口鲇血清分離到一種天然的凝集素分子，能夠凝集多種不同的抗原物質(zhì)。該天然凝集素不能透過(guò)半透膜，是一種大分子物質(zhì)；經(jīng)過(guò)蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶作用過(guò)后，喪失凝集活性，是一種蛋白質(zhì)；用DNas

6、e、RNase和脂溶劑乙醚處理過(guò)后，其凝集活性保持不變，說(shuō)明其組成與核酸和脂類(lèi)物質(zhì)無(wú)關(guān)。該凝集素耐熱性好，75℃條件下保溫1h活性保持不變；而且對(duì)SDS不敏感。在一定的溫度范圍內(nèi)(4℃～37℃)，隨著溫度的升高該凝集素凝集能力增強(qiáng)。經(jīng)糖的專(zhuān)一性抑制實(shí)驗(yàn)顯示，蔗糖和半乳糖對(duì)凝集反應(yīng)有抑制作用，說(shuō)明這2種糖分子是凝集素在識(shí)別和凝集過(guò)程中起一定作用的糖分子。 從中華倒刺鲃血清分離到一種天然的凝集素，能夠凝集多種不同的抗原物質(zhì)。該天然凝

7、集素不能透過(guò)半透膜，是一種大分子物質(zhì)；經(jīng)過(guò)蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶作用過(guò)后，喪失凝集活性，是一種蛋白質(zhì)；用DNase、RNase和脂溶劑乙醚處理過(guò)后，其凝集活性保持不變，說(shuō)明其組成與核酸和脂類(lèi)物質(zhì)無(wú)關(guān)。該凝集素耐熱性好，60℃條件下保溫1h活性保持不變；而且對(duì)SDS不敏感。在一定的溫度范圍內(nèi)(4℃～37℃)，隨著溫度的升高該凝集素凝集能力增強(qiáng)。經(jīng)糖的專(zhuān)一性抑制實(shí)驗(yàn)顯示，蔗糖和乳糖對(duì)凝集反應(yīng)有抑制作用，說(shuō)明這2種糖分子是凝集素在識(shí)別和