金屬鉛對(duì)小鼠精子參數(shù)與精子DNA影響的研究.pdf

1、本文分三個(gè)部分進(jìn)行探討:
　　第一部分：小鼠鉛中毒模型的構(gòu)建與鑒定
　　目的：小鼠通過(guò)自由飲水，給予醋酸鉛染毒6周，觀察醋酸鉛對(duì)小鼠體重及飲水量的影響，并通過(guò)檢測(cè)全血及睪丸中鉛濃度鑒定鉛染毒模型是否構(gòu)建成功。
　　方法：以含不同濃度醋酸鉛的去離子化水喂養(yǎng)小鼠6周，按不同醋酸鉛濃度分為陰性對(duì)照組，0.1％醋酸鉛組，0.25％醋酸鉛組，0.5％醋酸鉛組，1.0％醋酸鉛組。每周記錄小鼠體重變化及飲水量變化。喂養(yǎng)6周后心臟采血

2、，并取一側(cè)睪丸，采用石墨爐原子吸收分光光度法檢測(cè)全血及睪丸組織中的鉛濃度。
　　結(jié)果：第1、2、3周，染毒組小鼠的體重變化與陰性對(duì)照組的體重變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值均<0.0005），陰性對(duì)照組的體重增加更明顯；第4、5、6周，染毒組小鼠與陰性對(duì)照組的體重變化沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值均>0.05）；染毒組小鼠與陰性對(duì)照組的6周總體重變化沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.579）。醋酸鉛濃度對(duì)小鼠的每周飲水量有顯著的影響，醋酸鉛濃度越高，小鼠每周飲

3、水量越少（P=0.00002）。與陰性對(duì)照組相比，染毒組小鼠的全血及睪丸組織中的鉛濃度明顯增高（P血=0.013，P睪丸=0.0001）
　　結(jié)論：醋酸鉛短時(shí)間內(nèi)影響小鼠體重增加，長(zhǎng)時(shí)間對(duì)小鼠體重影響不明顯。去離子化水中醋酸鉛濃度越高，小鼠每周飲水量越少。從全血及睪丸中鉛濃度可見(jiàn)喂養(yǎng)小鼠醋酸鉛可成功構(gòu)建小鼠鉛中毒模型。
　　第二部分：鉛對(duì)小鼠睪丸、附睪形態(tài)學(xué)及精子參數(shù)的影響
　　目的：研究醋酸鉛是否對(duì)小鼠睪丸、附睪組織

4、形態(tài)學(xué)及精子參數(shù)有影響。
　　方法：構(gòu)建小鼠鉛中毒模型，取一側(cè)睪丸及附睪于改良的Davidson固定液（mDF）中固定后，脫水、透明、浸蠟、包埋、切片，行蘇木素-伊紅（HE）染色，鏡下觀察睪丸、附睪組織的形態(tài)學(xué)改變。附睪上游法收集精子，手工法進(jìn)行精子濃度、活力、存活率的測(cè)定，HE染色進(jìn)行精子形態(tài)學(xué)的檢測(cè)。
　　結(jié)果：與陰性對(duì)照組相比，染毒組小鼠的睪丸、附睪組織切片形態(tài)上，無(wú)明顯改變。與陰性對(duì)照組相比，各染毒組小鼠附睪精子濃度

5、、存活率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P濃度=0.86，P存活率=0.087，P總活精子=0.111）。與陰性對(duì)照組相比，0.5％醋酸鉛組、1.0％醋酸鉛組小鼠附睪精子活力具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異（P值均<0.01）。與陰性對(duì)照組相比，各染毒組小鼠附睪精子畸形率均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值均<0.05）。
　　結(jié)論：6周的鉛染毒對(duì)小鼠睪丸、附睪大體觀影響不大，對(duì)附睪精子濃度、存活率的影響不明顯，鉛可能通過(guò)影響精子活力、形態(tài)從而影響精子的功能。
　　第三部

6、分：鉛對(duì)小鼠精子DNA的影響
　　目的：通過(guò)精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析（SCSA）、彗星試驗(yàn)、末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶脫氧尿苷三磷酸缺口末端標(biāo)記（TUNEL）檢測(cè)醋酸鉛是否損傷小鼠精子DNA。
　　方法：附睪上游法收集精子，分別通過(guò)SCSA、彗星試驗(yàn)、TUNEL檢測(cè)鉛對(duì)精子DNA的影響。
　　結(jié)果：附睪精子SCSA結(jié)果顯示，0.5％醋酸鉛組、1.0％醋酸鉛組的精子DFI值升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.5％=0.002，P1.0％<

7、0.001）。附睪精子彗星試驗(yàn)結(jié)果顯示，0.25％醋酸鉛組、0.5％醋酸鉛組及1.0％醋酸鉛組的彗尾長(zhǎng)度、彗尾 DNA％、彗尾位移長(zhǎng)度和Olive彗尾位移均比陰性對(duì)照組的增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均<0.00001）。附睪組織切片TUNEL結(jié)果顯示，各染毒組的精子凋亡指數(shù)（AI）升高（P值均<0.00001），且隨著濃度升高，精子的AI越高（P值均<0.05）。
　　結(jié)論：通過(guò)SCSA、彗星試驗(yàn)、TUNEL檢測(cè)鉛對(duì)小鼠附睪精子