IGFBP-4保護下肢缺血性損傷的實驗研究.pdf

1、下肢缺血性疾病是周圍血管疾病(peripheral artery disease，PAD)中最常見的疾病，甚至可以發(fā)展成嚴重肢體缺血，許多病人最后不得不承受著截肢的痛苦，這些患者的生活質量評分甚至比癌癥患者、慢性心臟病患者的評分還低。目前臨床上治療下肢缺血的方法主要是藥物治療和手術治療等，但是效果仍不滿意。在下肢缺血病理過程中，血管阻塞后致下肢發(fā)生缺血、缺氧性改變，產(chǎn)生大量的氧自由基，從而導致DNA損傷的發(fā)生。而γ-H2AX的形成是DN

2、A雙鏈斷裂的一個標志，伴隨DNA損傷的發(fā)生而出現(xiàn)。
　　 研究顯示W(wǎng)nt信號通路在下肢缺血損傷修復過程中扮演著十分重要的角色，而Wnt信號通路的激活與DNA損傷之間有著十分密切的關系，這就促使我們?nèi)パ芯縒nt經(jīng)典途徑抑制后是否會導致DNA損傷的減少，從而起到保護下肢缺血后損傷的作用。最近的研究表明胰島素樣生長因子結合蛋白-4(Insulin like growth factor bindingproteins-4，IGFBP-4

3、)是強有力的Wnt經(jīng)典通路抑制劑，本研究對IGFBP-4和DNA損傷的關系及其在下肢缺血損傷修復過程中的作用進行了探討和研究，旨在發(fā)現(xiàn)IGFBP-4對于減少下肢缺血性疾病損傷的重要作用，并為臨床治療提供初步的思路。本研究主要內(nèi)容如下:
　　 目的:探討IGFBP-4在下肢缺血性疾病中的保護作用，并闡明其具體作用機制，為進一步的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、通過體外實驗，用雙氧水刺激誘導細胞發(fā)生D

4、NA損傷，檢測IGFBP-4對DNA損傷的保護作用;再通過LiCl(Wnt經(jīng)典途徑的激動劑)刺激和敲除β-catenin(Wnt經(jīng)典信號通路過程中一個重要分子)，驗證IGFBP-4對雙氧水引導的DNA損傷的保護作用是否通過抑制Wnt經(jīng)典途徑來實現(xiàn)的。
　　 2、在體內(nèi)實驗中，結扎小鼠下肢股動脈造成下肢缺血模型，將IGFBP-4、PBS(Phosphate Buffer Solution，PBS)局部注射后，使用Laser Dop

5、pler及病理切片觀察IGFBP-4對下肢缺血是否具有保護作用;再通過Western Blot來驗證該保護作用是否通過抑制Wnt經(jīng)典途徑減少DNA損傷來實現(xiàn)的。
　　 結果:在體外實驗中，雙氧水刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human Umbilical VeinEndothelial Cells，HUVEC)能夠引起其發(fā)生γ-H2AX的升高，即導致細胞發(fā)生了DNA損傷;IGFBP-4能夠導致HUVEC的β-catenin表達逐漸下調(diào)，

6、即阻止的Wnt經(jīng)典信號通路，LiCl則引起B(yǎng)-catenin表達逐漸上調(diào)，即激活了細胞的Wnt經(jīng)典信號通路;IGFBP-4預處理HUVEC后能夠減少雙氧水引起的DNA損傷，而LiCl則增加了DNA損傷。
　　 同樣，在小鼠體內(nèi)實驗中，Laser Doppler和病理結果顯示在下肢缺血模型建立后，注射IGFBP-4組的小鼠下肢損傷程度較對照組要輕;Western Blot的結果表明IGFBP-4注射的小鼠組織B-catenin表達

7、水平較注射PBS的小鼠要低，并且γ-H2AX的表達也低，即DNA損傷程度輕。
　　 結論:
　　 1、在體外，IGFBP-4能夠保護H2O2引導的DNA損傷;
　　 2、在體外，IGFBP-4是通過抑制Wnt經(jīng)典信號通路從而減少H2O2刺激引導的DNA損傷;
　　 3、在小鼠體內(nèi)，IGFBP-4能夠保護下肢缺血性損傷導致的DNA損傷;
　　 4、在小鼠體內(nèi)，IGFBP-4也是通過抑制Wnt經(jīng)典信號