牛卵母細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)顯微受精技術(shù)研究.pdf

1、本試驗(yàn)研究目的在于探討牛卵母細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)顯微受精(Intracytoplasmic sperminiection ICSI)操作中，卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)時(shí)間、卵母細(xì)胞第一極體位置、精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)濃度、精子狀態(tài)以及受精卵化學(xué)激活方法對ICSI卵體外發(fā)育的影響。 1.在不同條件下進(jìn)行牛ICSI操作，以ICSI卵的卵裂率和囊胚發(fā)育率驗(yàn)證獲試驗(yàn)條件的有效性。體外成熟培養(yǎng)20 h，24 h和28 h的卵母細(xì)胞用于ICSI時(shí)

2、，ICSI卵的形態(tài)完整率分別為94.6％(175/185)，97.2％(173/178)和96.4％(189/196)(P>0.05)；成熟培養(yǎng)24 h和28 h的卵母細(xì)胞，其ICSI卵的卵裂率(73.4％和70.9％)和囊胚發(fā)育率(31.8％和28.6％)顯著高于成熟培養(yǎng)20 h的卵母細(xì)胞(61.1％和21.7％)(P<0.05)。 2.對ICSI卵分別采用三種方法進(jìn)行激活，對照組不進(jìn)行激活處理。結(jié)果表明，ICSI卵不進(jìn)行激活

3、處理時(shí)，卵裂率較低，沒有ICSI卵能夠發(fā)育到囊胚；用乙醇或離子霉素激活時(shí)，ICSI卵的卵裂率(51.9％和56.6％)和囊胚發(fā)育率(14.5％和17.9％)顯著高于未激活組(15.8％和0)(P<0.05)；用離子霉素和6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)聯(lián)合激活時(shí)，ICSI卵的卵裂率和囊胚發(fā)育率分別為70.8％和28.5％，顯著高于乙醇激活或離子霉素激活，以及未激活組(P<0.05)。 3.顯微注射時(shí)將卵母細(xì)胞第一極體調(diào)整到相當(dāng)于

4、時(shí)鐘6點(diǎn)或12點(diǎn)的方向，所獲得的ICSI卵的形態(tài)完整率(95.1％和94.0％)、卵裂率(69.3％和67.8％)和囊胚發(fā)育率(30.7％和28.8％)都無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 4.采用含5％，10％和15％PVP的精子操作液處理精子后對成熟培養(yǎng)24 h的卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI操作，PVP濃度為5％和10％時(shí)，ICSI卵的卵裂率(73.2％和66.9％)和囊胚發(fā)育率(32.7％和29.7％)差異不顯著(P>0.05)，但二

5、者均顯著高于15％PVP濃度組的卵裂率和囊胚發(fā)育率(51.0％和16.3％)(P<0.01.)。 5.對成熟培養(yǎng)24 h的卵母細(xì)胞注射獲能精子時(shí)，ICSI卵的卵裂率和囊胚發(fā)育率(72.7％和31.4％)高于未獲能精子組(69.4％和29.3％)和不運(yùn)動(dòng)精子組(71.5％和30.4％)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 結(jié)論認(rèn)為，選擇體外成熟培養(yǎng)24 h的牛卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI操作時(shí)，將卵母細(xì)胞第一極體位置調(diào)整到相當(dāng)于時(shí)鐘