大蒜揮發(fā)油提取鑒定及功效研究.pdf

1、研究目的：建立水蒸氣蒸餾法提取大蒜揮發(fā)油的最佳工藝條件；分析大蒜揮發(fā)油的化學(xué)成分并建立大蒜揮發(fā)油中大蒜素的測(cè)定方法，同時(shí)結(jié)合大蒜揮發(fā)油功效實(shí)驗(yàn)，為利用大蒜揮發(fā)油開發(fā)成為保健食品、食品添加劑及藥品提供依據(jù)。
　　 研究方法：（1）采用水蒸氣蒸餾法，正交設(shè)計(jì)考察蒸餾時(shí)間、加水量、發(fā)酵溫度、浸泡時(shí)間對(duì)大蒜揮發(fā)油提取率的影響，確定最佳提取條件。（2）利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析大蒜揮發(fā)油各組成成分，并使用氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定大蒜揮發(fā)油中大

2、蒜素的含量。（3）通過測(cè)量抑菌環(huán)、最低抑制濃度、最小殺菌濃度，研究大蒜揮發(fā)油的抑菌、殺菌效果。（4）72只雄性SD大鼠，通過喂飼高脂飼料制備肥胖高脂大鼠模型，隨機(jī)分為6組：陰性對(duì)照組（給予蒸餾水灌胃）、高脂模型A組（給予1％吐溫-80灌胃）、高脂模型B組（給予蒸餾水灌胃）、大蒜揮發(fā)油低劑量組（給予11.6mg/bw·kg·d大蒜揮發(fā)油乳劑灌胃）、大蒜揮發(fā)油中劑量組（給予46.3mg/bw·kg·d大蒜揮發(fā)油乳劑灌胃）和大蒜揮發(fā)油高劑量組

3、（給予92.6mg/bw·kg·d大蒜揮發(fā)油乳劑灌胃），8周后觀察給藥后大鼠各項(xiàng)指標(biāo)，評(píng)價(jià)大蒜揮發(fā)油的降脂減肥作用。（5）利用四氧嘧啶造模后的糖尿病小鼠，給予高、中、低三個(gè)濃度的大蒜揮發(fā)油（92.6、46.3、23.2mg/bw·kg·d）干預(yù)，陰性對(duì)照組和糖尿病模型組給予1％吐溫-80灌胃，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后根據(jù)動(dòng)物血糖值、糖耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及各項(xiàng)血生化指標(biāo)的測(cè)定，評(píng)價(jià)大蒜揮發(fā)油對(duì)糖尿病小鼠的輔助降血糖作用。（6）體外通過MTT法檢測(cè)不同濃度大

4、蒜揮發(fā)油（200、100、50、25、12.5、6.3、3.1mg/L）對(duì)乳鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)性作用，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞存活率及其抗凋亡作用對(duì)大蒜揮發(fā)油的細(xì)胞損傷保護(hù)作用進(jìn)行研究。
　　 研究結(jié)果：（1）影響大蒜揮發(fā)油提取率的主要因素為蒸餾時(shí)間，其次為加水量、發(fā)酵溫度、浸泡時(shí)間，最佳提取工藝條件為發(fā)酵溫摩35℃、浸泡時(shí)間4h、加水量3.5倍、蒸餾時(shí)間2h，在此條件下?lián)]發(fā)油提取率為0.35％。（2）大蒜

5、揮發(fā)油經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析，共分離出25個(gè)峰，鑒定出18個(gè)化合物，占揮發(fā)油總量的95.09％，其中含硫化合物16種，占揮發(fā)油總量的92.96％；經(jīng)分析，大蒜揮發(fā)油中大蒜素的線性范圍為0.036～0.576mg/ml，方法重復(fù)性RSD為0.56％，平均回收率為95.61％，在大蒜揮發(fā)油中含量為121.17mg/100g。（3）大蒜揮發(fā)油對(duì)金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、福氏志賀菌等5種細(xì)菌有抑制作用，但對(duì)乙型副

6、傷寒沙門氏菌無效。（4）通過對(duì)高脂血癥大鼠的降脂減肥作用研究發(fā)現(xiàn)，大蒜揮發(fā)油具有降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重、體內(nèi)脂肪含量、脂體比、動(dòng)脈硬化指數(shù)、Lee's指數(shù)、血清總膽固醇（TC）水平和升高血清中高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平等作用，但對(duì)降低血清中甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）效果不理想。（5）給予糖尿病小鼠大蒜揮發(fā)油干預(yù)后，其高劑量組降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物糖化血清蛋白（GSP）、尿素氮（BUN）、TG、TC水平、肝臟、腎臟指數(shù)以

7、及血糖、糖耐量等各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果顯示差異均具有顯著性。（6）通過原代培養(yǎng)乳鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞，建立細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型，進(jìn)而評(píng)價(jià)大蒜揮發(fā)油對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞存活率及其抗凋亡作用，顯示大蒜揮發(fā)油濃度為12.5mg/L時(shí)細(xì)胞存活率最高。
　　 結(jié)論：（1）水蒸氣蒸餾法提取大蒜揮發(fā)油的最佳提取工藝條件大大提高了大蒜揮發(fā)油的提取率，簡(jiǎn)單安全、不污染環(huán)境、適用于工業(yè)生產(chǎn)。（2）利用氣-質(zhì)

8、聯(lián)用分析大蒜揮發(fā)油的主要成分，豐富了國內(nèi)外對(duì)于大蒜揮發(fā)油的成分研究，為進(jìn)一步利用打下了基礎(chǔ)；氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定大蒜揮發(fā)油中大蒜素的方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用來測(cè)定大蒜揮發(fā)油中大蒜素含量。（3）大蒜揮發(fā)油對(duì)革蘭氏陽性菌中的金黃色葡萄球菌和革蘭氏陰性菌中的綠膿桿菌的抑殺效果較好，而對(duì)乙型副傷寒沙門氏菌不具有抑菌和殺菌能力。（4）不同濃度的大蒜揮發(fā)油對(duì)高脂血癥大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)均有一定的影響，尤以高劑量組效果最為明顯，提示大蒜揮發(fā)油具有降脂減