雌激素受體α及其變異體在HBV相關(guān)肝病中的表達(dá)及意義.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是一個嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題,對人類健康造成了極大的威脅。我國是原發(fā)性肝癌的高發(fā)國家,與歐洲國家引起肝癌的主要危險因素不同,我國原發(fā)性肝癌主要是由慢性HBV感染引起,HCC患者中約70％以上有HBV感染。同時,在HBV慢性感染者當(dāng)中,重型乙型肝炎、肝硬化、肝癌的發(fā)病率呈現(xiàn)顯著的性別差異,男女性別比約5-10:1。男性重型肝炎、肝硬化、肝癌患者的預(yù)后較差、死亡率較高,女性肝癌患者無論

2、是自然生存率還是切除術(shù)后生存率均高于男性。造成肝癌性別差異的因素一直以來被認(rèn)為是揭示肝癌發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵。流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明,除了經(jīng)典的乳腺癌和前列腺癌之外,肝癌也是性激素影響極其顯著的腫瘤之一。
　　大量的研究提示,雌激素與肝癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。雌激素是通過與特異性的受體(雌激素受體)相結(jié)合而發(fā)揮作用的,雌激素受體(estrogen receptor,ER)主要有α和β兩種亞型。我們前期研究發(fā)現(xiàn)ERα基因的29C-IVS1-40

3、1C單倍型不僅能夠增加HBV感染清除還能降低HBV相關(guān)的肝硬化、肝癌的易感性,提示ERα與HBV感染疾病的進(jìn)程有關(guān)。2012年臺灣學(xué)者 Wang等研究發(fā)現(xiàn),ERα可以通過與肝細(xì)胞核因子-4α(hepatocyte nuclear factor-4α,HNF-4α)交互作用來抑制HBV基因的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)一步解釋了HBV相關(guān)HCC男性多于女性的原因。
　　1998年Villa等首次報道:ERα第5外顯子缺失而產(chǎn)生的變異體(ERαδ5)在H

4、CC中也有表達(dá),且ERαδ5的表達(dá)與肝癌患者的預(yù)后相關(guān)。國內(nèi)關(guān)于這方面的研究較少,特別是ERαδ5蛋白在HCC組織中的表達(dá)情況目前尚無報道。因此,本研究擬采用免疫組織化學(xué)、RT-PCR及Western blot的方法來檢測HBV相關(guān)肝病患者肝組織中ERα及其變異體的mRNA和蛋白的表達(dá)及規(guī)律,以探討ERα及變異體在HBV相關(guān)肝病發(fā)生發(fā)展中的作用,以望對HBV相關(guān)肝病的內(nèi)分泌治療及預(yù)后判斷提供依據(jù)。
　　本研究分為三部分:第一部分以

5、HBV相關(guān)HCC為研究對象,采用免疫組化及Western blot的方法研究野生型ERα和ERβ在HBV相關(guān)HCC組織中的表達(dá)及規(guī)律,并分析ERα、ERβ的表達(dá)與HCC患者臨床病理特征的關(guān)系。第二部分以HBV相關(guān)HCC、癌旁及慢性乙型肝炎為研究對象,采用RT-PCR、TA克隆測序的方法研究ERα及變異體在HBV相關(guān)HCC、癌旁及慢性乙型肝炎中的表達(dá)及規(guī)律,并確定變異體類型。第三部分在第二部分確定變異體類型的基礎(chǔ)上,制作變異體特異性抗體,

6、并以HBV相關(guān)肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎為研究對象,采用組織芯片免疫組化及Western blot的方法研究變異體ERαδ5在HBV相關(guān)肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎中的表達(dá)規(guī)律,并分析ERαδ5的表達(dá)與HBV相關(guān)HCC患者臨床病理特征的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.ERα在HBV相關(guān)肝癌肝組織中主要表達(dá)定位于細(xì)胞漿,陽性表達(dá)率為35.7%。在腫瘤直徑≤5cm和TNM分期中Ⅰ~Ⅱ期患者的ERα表達(dá)明顯高于腫瘤直徑>5cm和TNM分期Ⅲ

7、~Ⅳ期的患者(P值分別為0.006和0.011),其表達(dá)與患者性別、年齡、血清中AFP水平、腫瘤分化程度及腫瘤結(jié)節(jié)多少差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.ERβ在HBV相關(guān)肝癌肝組織中主要表達(dá)定位于細(xì)胞漿,其表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小、TNM分期、腫瘤分化程度、結(jié)節(jié)多少及血清AFP水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.野生型ERαmRNA在乙肝相關(guān)肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎肝組織中的表達(dá)率分別為100%、88.2%和7

8、7.8%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.在乙肝相關(guān)肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎肝組織中有ERα第五外顯子缺失變異體ERαδ5mRNA的表達(dá),其表達(dá)率分別為76.5%、76.5%和38.9%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.169,P=0.025)。
　　5.組織芯片免疫組化提示ERαδ5在肝癌、癌旁及正常肝組織中均定位于細(xì)胞漿,陽性表達(dá)率分別為67.2%、50%和25%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.308,P=0.026)。

9、　　6.Western blot檢測發(fā)現(xiàn)ERαδ5蛋白在肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎組織陽性表達(dá)率分別為88.2%、76.5%和61.1%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.460,P=0.177)。
　　結(jié)論:
　　1.ERα和ERβ在慢性乙型肝炎、乙肝相關(guān)肝癌及癌旁組織中均有表達(dá),且主要定位于細(xì)胞漿。
　　2.ERα在HBV相關(guān)HCC中存在差異表達(dá),在腫瘤直徑≤5cm和TNM分期中Ⅰ~Ⅱ期患者的ERα表達(dá)明顯高于腫瘤直徑>5