遠(yuǎn)程缺血后適應(yīng)對(duì)大鼠腦缺血的保護(hù)作用及其對(duì)Akt，GSK-3β的影響.pdf

1、目的：近來研究發(fā)現(xiàn)，缺血后適應(yīng)(Ischemic postconditioning，PC)對(duì)大鼠腦缺血/再灌注(Ischemia/reperfusion，I/R)損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用，可以激活多種神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。而對(duì)于遠(yuǎn)程缺血后適應(yīng)(Remote ischemic postconditioning,RPC)的研究甚少。本研究的目的是通過制備大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞(Middle cerebral artery occlusion，MCAO)線栓

2、模型，初步探討研究RPC對(duì)大鼠缺血性腦損傷是否具有保護(hù)作用，以及RPC對(duì)大鼠腦內(nèi)蛋白激酶B(Protein kinase B，Akt)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)表達(dá)的影響。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)分為兩部份：第一部分建立穩(wěn)定的大鼠MCAO線栓模型，證明遠(yuǎn)程缺血后適應(yīng)對(duì)缺血腦組織的保護(hù)作用。24只健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(280-310g)隨機(jī)

3、分為3組，每組8只：(1)對(duì)照組(control)：大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞2小時(shí)，再灌注24小時(shí)。(2)缺血即刻后適應(yīng)組(Remote ischemic postconditioning at beginning of ischemia，I-RPC)：大鼠大腦中動(dòng)脈缺血即刻給予雙下肢缺血訓(xùn)練。(3)再灌注即刻后適應(yīng)組(Remoteischemic postconditioning at beginning ofreperfusion，R-R

4、PC)：大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注即刻給予雙下肢缺血訓(xùn)練。雙下肢缺血訓(xùn)練的方法是分離大鼠雙側(cè)股動(dòng)脈，夾閉10min，放開10min，如此三個(gè)循環(huán)。各組大鼠再灌注24小時(shí)后處死，TTC染色拍照，Image-Pro Plus軟件分析，計(jì)算腦梗死體積。12分評(píng)分法進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。第二部分探討遠(yuǎn)程缺血后適應(yīng)腦保護(hù)作用的機(jī)制，研究其對(duì)Akt，GSK-3β通路的影響。24只健康雄性SD大鼠(280-310g)隨機(jī)分為4組，每組6只：假手術(shù)組(sha

5、m)；control；I-RPC；R-RPC，各組大鼠于再灌注24小時(shí)處死，留取石蠟切片標(biāo)本。HE染色計(jì)算腦梗死體積以及免疫熒光半定量測(cè)定Akt，GSK-3β的磷酸化水平。再取16只健康雄性SD大鼠按以上分組留取腦蛋白標(biāo)本，Western blot定量測(cè)定Akt、GSK-3β磷酸化水平。
　　 結(jié)果：(1)TTC染色和HE染色腦梗死體積分析顯示，I-RPC組和R-RPC組較對(duì)照組梗死體積明顯減少，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。

6、(2)大鼠再灌注24h后神經(jīng)功能評(píng)分顯示，I-RPC組和R-RPC組較對(duì)照組評(píng)分有減少趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)免疫熒光結(jié)果顯示I-RPC組和R-RPC組缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)和基底節(jié)區(qū)p-Akt，p-GSK-3β的磷酸化水平較對(duì)照組增高。但只有R-RPC組與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。(4)Western blot結(jié)果表明R-RPC組缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)和基底節(jié)區(qū)p-Akt，p-GSK-3β的磷酸化水平較對(duì)照組明顯增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(