當(dāng)歸紅芪超濾物延緩老齡大鼠腦衰老及對腦組織mt-DNA缺失表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物對自然衰老大鼠腦組織作用的實驗研究，探討本品抗衰老的作用及其機(jī)制，從而為該藥的開發(fā)和推廣提供實驗依據(jù)。
　　方法：采用3月齡雄性 Wistar年輕健康大鼠12只，作為正常年輕對照組（A組）。24月齡雄性 Wistar自然衰老大鼠72只，隨機(jī)分為6組，每組12只，即老年空白對照組（B組）、當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物5萬分子量組（C組）、當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物10萬分子量組（D組）、當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物20萬分子

2、量組（E組）、當(dāng)歸紅芪水煎劑組（F組）、陽性藥物對照組（G組）各12只。將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，A組和B組給予生理鹽水（每日1次，每次7ml/Kg.d）；C、D、E、F各組給予相應(yīng)截留分子量的當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物和當(dāng)歸紅芪水煎劑（每日1次，每次19.428 g生藥/Kg·d）；G組給予維生素E（每日1次，每次54mg/Kg.d）。共給藥70天后觀察以下指標(biāo)：1.通過水迷宮實驗檢測其對學(xué)習(xí)記憶功能的影響；2.腦指數(shù)；3.光鏡下腦組織形態(tài)學(xué)

3、的觀察；4.電鏡下腦細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察；5.生化法測定腦組織中SOD活力，MDA含量；6.用酶聯(lián)免疫法測定腦組織中神經(jīng)遞質(zhì)含量；7.用PCR法測定腦組織mt-DNA缺失的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）水迷宮檢測結(jié)果：水迷宮實驗分為定向航行實驗和空間探索實驗。與A組相比，B組搜索到平臺的潛伏期延長，穿越平臺所在象限的次數(shù)明顯減少，有顯著性差異(P＜0.01)。與B組比較，D，E，F(xiàn)，G組大鼠潛伏期縮短，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），D、G組大

4、鼠穿越平臺所在象限的次數(shù)明顯增加，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　（2）腦指數(shù)結(jié)果： A組大鼠與B，C，D，E，F(xiàn)，G各組大鼠相比，腦指數(shù)存在差異(P＜0.05)，該結(jié)果提示大鼠衰老過程中存在腦萎縮現(xiàn)象。
　?。?）光鏡下形態(tài)學(xué)觀察：青年組大鼠神經(jīng)細(xì)胞排列致密整齊，層次分明，可見多層排列細(xì)胞；衰老組大鼠神經(jīng)細(xì)胞層次不清楚，排列稀疏、雜亂，脫失明顯；用藥組大鼠神經(jīng)細(xì)胞層次欠清楚，排列稀疏，有細(xì)胞脫失；
　?。?）透射

5、電鏡結(jié)果：青年組大鼠大腦皮層、海馬神經(jīng)細(xì)胞核呈圓形，染色質(zhì)均一，線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體均正常。衰老組大鼠大腦海馬神經(jīng)元細(xì)胞核不規(guī)則，核膜內(nèi)褶，染色質(zhì)大量聚集成塊狀，高密度密集于核膜處，出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象；皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞器的數(shù)量明顯減少，線粒體水腫，出現(xiàn)大量脂褐素。與衰老組大鼠比較，用藥組大鼠大腦神經(jīng)元部分核膜形狀不規(guī)則，染色質(zhì)欠均一，線粒體輕度水腫。
　?。?）SOD活力結(jié)果：與A相比，B組腦組織SOD活力明顯降低（P＜0.01

6、）；與B組相比，C，D，E，F(xiàn)，G組腦組織中SOD活力均顯著增高（P＜0.01）；與D組相比，C，E，F(xiàn)組有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　?。?）MDA含量結(jié)果：與A相比，B組腦組織中MDA含量明顯升高(P＜0.01)；與B組相比，C，D，E，F(xiàn)，G組腦組織中MDA含量均顯著降低(P＜0.01)；與D組相比，C，E，F(xiàn)組有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　?。?）神經(jīng)遞質(zhì)含量測定：與A組比較，B組腦組織中Ach、DA、NE、

7、5-HT含量顯著降低(P＜0.01)；與B組相比，D、E、G組腦組織中Ach、DA、NE、5-HT含量增高，有顯著差異(P＜0.01)；與D組相比，C，E組有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　?。?）線粒體DNA(mt-DNA)缺失情況：與A組比較，B組腦缺失mt-DNA/內(nèi)參mt-DNA比例明顯增高(P＜0.01)；與B組相比，D、G組腦缺失mt-DNA/內(nèi)參mt-DNA比例降低(P＜0.01)。
　　結(jié)論：當(dāng)歸紅芪超濾物有