內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路在十溴聯(lián)苯醚致小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系HT-22細(xì)胞凋亡中作用.pdf

1、目的：
　　研究十溴聯(lián)苯醚(decabromodiphenyl ether,BDE-209)暴露對小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系(HT-22細(xì)胞)的細(xì)胞生長形態(tài)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞存活率、細(xì)胞凋亡損傷和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路中的相關(guān)蛋白 caspase12、GRP78、PERK蛋白表達(dá)水平的影響,初步討論BDE-209對HT-22細(xì)胞凋亡的影響和誘導(dǎo)凋亡的機制,為研究 BDE-209致HT-22細(xì)胞凋亡的機制提供依據(jù)。
　　方法：
　　培養(yǎng)HT-

2、22細(xì)胞之后暴露于BDE-209中,總共分為6個劑量組,分別為對照組(含有1％DMSO的培養(yǎng)基)和劑量組(劑量分別為6.25μg/ml BDE-209、12.5μg/ml BDE-209、25μg/ml BDE-209、50μg/ml BDE-209、100μg/ml BDE-209)。每個實驗組設(shè)置3個平行樣。染毒24小時之后在倒置顯微鏡下觀察每組的細(xì)胞形態(tài)差異;MTT比色分析法檢測每組細(xì)胞存活率;Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)

3、胞凋亡情況;采用免疫印跡法檢測HT-22細(xì)胞中caspase12、GRP78、PERK蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　倒置顯微鏡觀察各個處理組的HT-22細(xì)胞形態(tài),實驗組可以觀察到細(xì)胞形態(tài)有所變形,細(xì)胞胞膜有發(fā)泡現(xiàn)象,隨著染毒劑量的增加,神經(jīng)突起變短,細(xì)胞空泡增加。在C(12.5μg/ml BDE-209)、D(25μg/ml BDE-209)、E(50μg/ml BDE-209)染毒劑量組可以看到細(xì)胞有明顯的皺縮、空泡、

4、脫落、消失。在 F(100μg/ml BDE-209)染毒劑量組中細(xì)胞幾乎已經(jīng)完全脫落。MTT比色法檢測HT-22細(xì)胞存活率,不同劑量染毒24小時與對照組相比,染毒劑量組細(xì)胞存活率顯著下降,其中染毒劑量為12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);同一劑量 BDE-209染毒不同時間時細(xì)胞存活率也相應(yīng)下降,染毒時間為8小時、12小時、16小時、20小時、24小時、30小時的細(xì)

5、胞存活率與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡情況,用試劑盒進(jìn)行染色之后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示:隨著染毒劑量的增加,分布在第二象限的早期凋亡細(xì)胞和第三象限的晚期凋亡細(xì)胞的比例呈現(xiàn)增加的趨勢,而第一象限的正常細(xì)胞的比例則逐漸減少。免疫印跡結(jié)果顯示:染毒劑量為12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml組與對照組之間caspase12、GRP78、PERK蛋白表達(dá)增加,caspa