EZH2蛋白在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細胞系的表達及對其細胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　通過檢測EZH2蛋白在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細胞(MCF-7/Tam+細胞)及他莫昔芬敏感乳腺癌MCF-7細胞（MCF-7/Tam-細胞）的表達情況，并探討EZH2對兩種乳腺癌細胞株增殖的影響。
　　方法：
　　1.通過Western blot法在MCF-7/Tam+細胞和MCF-7/Tam-細胞中檢測EZH2蛋白表達差異。
　　2.采用10 nmol/l的雌二醇和10 nmol/l4-羥他莫昔

2、芬(4-OHT)分別處理MCF-7/Tam-細胞24 h后檢測EZH2蛋白的變化。
　　3.使用LipofectamineTM2000將靶向抑制EZH2的siRNA（siRNA-EZH2）轉(zhuǎn)染至MCF-7/Tam+細胞，運用實時 PCR檢測EZH2基因的相對表達量，Western blot法檢測EZH2蛋白表達量以驗證siRNA的有效性。
　　4.將siRNA-EZH2轉(zhuǎn)染至MCF-7/Tam+和MCF-7/Tam-細胞，采

3、用細胞計數(shù)檢測細胞數(shù)，MTT檢測細胞增殖情況（570 nm波長處吸光度值）。
　　結(jié)果：
　　1. EZH2蛋白在 MCF-7/Tam+細胞中相對表達量為2.237±0.091，高于在MCF-7/Tam-細胞中的相對表達量（1.870±0.114）（t=8.582，P=0.013）。
　　2.與陰性對照組（EZH2相對表達量：0.480±0.017）相比，經(jīng)10 nmol/l的雌二醇誘導MCF-7/Tam-細胞24 h

4、后EZH2蛋白相對表達量為0.657±0.015，相同濃度的4-羥基他莫昔芬處理 MCF-7/Tam-細胞24 h后 EZH2蛋白相對表達量為0.423±0.012（F=175.032，P=0.000）。
　　3.轉(zhuǎn)染 siRNA-EZH2至 MCF-7/Tam+細胞后，EZH2 mRNA相對表達量下降了69％（t=14.061，P=0.005），EZH2蛋白的相對表達量降低了42%（t=15.366，P=0.004），差異有統(tǒng)計

5、學意義。
　　4.細胞計數(shù)結(jié)果顯示與對照組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2的MCF-7/Tam-細胞組細胞數(shù)在第3，4，5天明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（F=77.515，P=0.001）；轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2的MCF-7/Tam+細胞組與對照組相比，細胞數(shù)在第3，4，5天明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（F=702.347，P=0.000）。
　　5. MTT結(jié)果顯示與對照組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2的MCF-7/Tam-細

6、胞組及轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2的MCF-7/Tam+細胞組在570 nm波長處的吸光度值分別降低了43%（t=9.676，P=0.011）、77%（t=65.069，P=0.000）,差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　相較于他莫昔芬敏感乳腺癌MCF-7細胞（MCF-7/Tam-細胞），EZH2在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細胞（MCF-7/Tam+）細胞中高表達。為確認siRNA的有效性，將靶向EZH2的siRNA（siR