天祝白牦牛、岷縣黑裘皮羊成纖維細胞庫的構建.pdf

1、本文選取天祝白牦牛、岷縣黑裘皮羊這兩種國家級畜禽遺傳資源保護品種作為研究對象，采用胰蛋白酶熱消化法，分別構建這兩種動物的多種組織的成纖維細胞庫，并對其生長曲線、倍增時間、染色體核型、同工酶、微生物污染以及轉化表達外源基因等特性進行研究，旨在成功地建立其成纖維細胞庫，從細胞水平上對優(yōu)良地方保護品種的遺傳資源進行有效保存和利用，并為其它動物遺傳資源保存提供可行的方法借鑒，同時所建的細胞庫還可為胚胎干細胞研究、轉基因工程、克隆等細胞分子生物學

2、研究提供寶貴材料。 天祝白牦牛保存樣本28個，凍存細胞472支；岷縣黑裘皮羊保存樣本23個，凍存細胞290支，試驗結果如下： 1、培養(yǎng)細胞的形態(tài)均為典型的成纖維型細胞，絕大部分呈梭形或不規(guī)則三角形，細胞生長時呈放射狀、火焰狀或旋渦狀走勢，細胞增殖快，生長旺盛。 2、繪制的細胞生長曲線顯示，復蘇細胞生長狀況很好，生長曲線均呈“S”型，細胞每代生長均經歷了潛伏期、指數生長期和停滯期，符合體外細胞生長規(guī)律。 3

3、、復蘇后細胞活率均保持在90％以上，傳代后生長狀況與凍存前基本一致，細胞形態(tài)和生長速度沒有明顯變化，凍存細胞生物學特征穩(wěn)定。 4、微生物污染檢測呈陰性，表明細胞未受到細菌、真菌、病毒及支原體污染。 5、核型分析：天祝白牦牛體外培養(yǎng)的成纖維細胞正常染色體數為2n=60，包括29對常染色體和1對性染色體，常染色體29對為端著絲點染色體，性染色體X和Y染色體為近中著絲粒染色體，計數50個細胞染色體數目時，并對2n=60的進行統(tǒng)

4、計，為74％，染色體中二倍體占主體；岷縣黑裘皮羊體外培養(yǎng)的成纖維細胞正常染色體數為2n=54，包括26對常染色體和1對性染色體，常染色體有3對為中著絲點染色體，23對為端著絲點染色體，進行統(tǒng)計50個細胞染色體，2n=54占84％，表明所建細胞庫的細胞穩(wěn)定的二倍體細胞占主體，遺傳性基本穩(wěn)定。 6、乳酸脫氫酶(LDH)同工酶是遺傳成因性的同工酶，天祝白牦牛各種細胞的乳酸脫氫酶同工酶都顯現五條區(qū)帶，從“陽極”到“陰極”分別為LDH<,

5、1>，LDH<,2>，LDH<,3> LDH<,4>，LDH<,5>，岷縣黑裘皮羊跟中細胞都顯現三條區(qū)帶，從“陽極”到“陰極”分別為LDH<,1>，LDH<,2>，LDH<,3>，通過LDH同工酶的區(qū)帶分布和相對百分含量的比較表明不同品種的LDH同工酶含量不同，說明LDH同工酶具有明顯的品種特異性；各品種細胞LDH同工酶酶譜表明，細胞遺傳性能穩(wěn)定。 7、紅色熒光質粒在成纖維細胞中的轉化表達，試驗表明成纖維細胞未發(fā)生與其它物種細胞