脂聯(lián)素對成年和老年缺血預處理保護作用的影響及脂聯(lián)素與冠心病及其危險因素的研究.pdf

1、第一部分
　　 研究目的
　　 1．探討成年和老年缺血預處理(ischemic preconditioning，IPC)心肌保護作用的不同及IPC后血管新生作用的差異，IPC后心肌組織中脂聯(lián)素的表達，明確脂聯(lián)素與IPC年齡依賴性保護作用減弱的關系及其可能的機制。
　　 2．觀察脂聯(lián)素特異小干擾核糖核酸（small interfering ribonucleic acid，siRNA）干預對成年IPC大鼠心肌脂聯(lián)素

2、蛋白表達和心肌梗死預后的影響，研究抑制脂聯(lián)素表達對老年大鼠心肌延遲IPC保護作用的影響。
　　 研究方法
　　 選取成年（4月齡）和老年（18月齡以上）SD大鼠各78只，建立IPC及心肌梗死(myocardial infarction，MI)模型，隨機分為5組。IPC組(n=48)：冠狀動脈前降支缺血6min再灌注6min，反復4個循環(huán)；假手術組(sham)(n=48):開胸操作同IPC組，但不阻斷冠脈血流；AMI組(n

3、=10)：sham組處理后24小時結扎冠狀動脈；IPC＋AMI組(n=10):IPC后24小時結扎冠狀動脈；空白對照組(control)(n=10)不進行任何處理。對IPC＋AMI組、AMI組及control組，于心梗后2周采用M型超聲心動圖檢測左室短軸縮短率（fractional shortening，F(xiàn)S）評價遠期心功能，留取心臟采用Masson’s Trichrome染色測量心肌梗死面積。對于sham組和IPC組，分別于IPC術后

4、0h、6h、12h和24h取出心臟（各亞組n=12），用western-blot、RealTime PCR及免疫組織化學染色方法檢測脂聯(lián)素在心肌組織中蛋白水平和mRNA的表達，并利用大鼠血漿標本做酶聯(lián)免疫吸附試驗，觀察循環(huán)中脂聯(lián)素的含量變化。并利用24h缺血心臟冰凍切片進行免疫組化染色，觀察毛細血管新生情況。
　　 成年SD大鼠60只，隨機分入5組：脂聯(lián)素siRNA＋IPC組(n=15)，scramblesiRNA＋IPC組(n

5、=15)，生理鹽水＋IPC組(n=10)，脂聯(lián)素siRNA＋IPC＋AMI組(n=10)和scramble siRNA＋IPC＋AMI組(n=10)。各組均于前降支兩側分點局部注射siRNA和轉染試劑的混合液或生理鹽水，對照組以scramble siRNA（錯譯siRNA）代替脂聯(lián)素siRNA。其中前3組大鼠于轉染后24h時建立IPC模型，24h后留取10只缺血部位心肌行western blot方法檢測脂聯(lián)素蛋白的表達，另5只留取冰凍切

6、片標本利用免疫組織化學染色法檢測局部血管新生情況。后2組大鼠于IPC后24h制作心肌梗死模型，14d后行心功能和心肌梗死面積的檢測。
　　 研究結果
　　 1．與AMI組相比，老年大鼠IPC＋AMI組死亡率顯著升高，成年大鼠無明顯變化。
　　 2．成年大鼠IPC＋AMI組FS較AMI組明顯升高，(33.10％±1.16%vs.23.99%±1.14%，p＜0.05)，心肌梗死面積顯著減小(22.45±2.67%L

7、V area vs.31.73±3.98%LV area，p＜0.05)；而老年大鼠則因死亡率較高，無法對心功能及心肌梗死面積進行統(tǒng)計。
　　 3．IPC后24h成年大鼠缺血心肌組織中免疫組化染色可見毛細血管染色加深，每平方毫米毛細血管數(shù)量顯著高于sham組；而老年大鼠二組之間變化不明顯。
　　 4．IPC后成年大鼠6h和12h時心肌組織中脂聯(lián)素mRNA和蛋白的表達水平分別較相對應的sham組顯著升高(p＜0.05)，免

8、疫組織化學染色可見缺血區(qū)心肌組織局部蛋白表達明顯高于非缺血區(qū)(p＜0.05)；而老年大鼠則相反，IPC后各時間點心肌組織中mRNA和蛋白的表達與sham組無明顯差別，免疫組化染色顯示局部缺血區(qū)蛋白表達較少。
　　 5．成年大鼠血漿中脂聯(lián)素水平在IPC后0h，6h和12h顯著升高(0h:7.40±0.47vs.10.90±1.74;6h:8.18±1.41vs.10.98±1.74;12h:6.97±1.02vs.9.31±0.9

9、6,p＜0.05)；而老年大鼠血漿中脂聯(lián)素水平直到24小時才開始升高。
　　 6．脂聯(lián)素siRNA干預抑制了成年大鼠IPC后24h時缺血部位心肌的脂聯(lián)素蛋白表達。IPC后24h時，脂聯(lián)素siRNA組大鼠的脂聯(lián)素蛋白表達明顯低于scramble siRNA組及生理鹽水組。
　　 7．脂聯(lián)素siRNA轉染后，與scramble siRNA對照組相比，F(xiàn)S顯著降低(22.42±1.28%vs.31.10±3.05%，p＜0.0

10、5)，心肌梗死面積明顯增加(30.17±2.44%LV area vs.22.35±1.29%LV area,p＜0.05)。
　　 研究結論
　　 1．老年大鼠IPC后梗死組死亡率顯著升高；而成年大鼠無明顯變化，且心功能較單純梗死組得到改善，提示成年大鼠缺血預處理對梗死心肌有保護作用，而老年大鼠的保護作用鈍化。
　　 2．成年大鼠IPC后缺血心肌組織中毛細血管新生明顯，而老年大鼠則較sham組未見明顯毛細血管新

11、生。
　　 3．成年大鼠IPC后心肌組織和血漿中脂聯(lián)素表達均升高，而老年大鼠則變化不明顯，提示IPC上調(diào)了成年大鼠脂聯(lián)素的表達，而IPC對老年大鼠脂聯(lián)素的表達影響不大；這一現(xiàn)象與成年大鼠IPC心肌保護作用及老年大鼠IPC保護作用鈍化的差異相對應，提示IPC的心肌保護可能正是通過上調(diào)脂聯(lián)素的表達來發(fā)揮作用，而老年大鼠的脂聯(lián)素表達未明顯升高導致心肌保護作用鈍化。
　　 4．心肌局部注射脂聯(lián)素siRNA能夠成功敲低脂聯(lián)素的蛋白

12、表達水平。
　　 5．心肌內(nèi)特異性敲除脂聯(lián)素的表達后，成年大鼠IPC后24h心肌缺血區(qū)毛細血管新生較scramble＋IPC組明顯減少，且IPC的心肌保護作用明顯減弱，進一步證實脂聯(lián)素通過促進血管新生參與了IPC的心肌保護作用。
　　 第二部分
　　 研究目的
　　 1．探討冠心病患者血清脂聯(lián)素與高敏C反應蛋白(hsCRP)水平及心血管危險因素之間的關系，以及血清脂聯(lián)素與冠心病嚴重程度的關系；
　　

13、 2．探討急性心肌梗死患者出現(xiàn)前驅心絞痛癥狀對血清脂聯(lián)素水平的影響。
　　 研究方法
　　 收集行冠狀動脈造影術的冠心病患者75例，其中急性心肌梗死(AMI)33例，不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)17例，穩(wěn)定型心絞痛(SAP)25例。健康對照組25例。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清脂聯(lián)素，免疫散射比濁法測定hsCRP，同時分析研究對象的危險因素與脂聯(lián)素的關系。并分析AMI患者有前驅癥狀者血清脂聯(lián)素的濃度。
　　 研究結果

14、
　　 急性冠脈綜合征(ACS)和SAP患者血清脂聯(lián)素濃度顯著低于正常對照組(p＜0.05)，hsCRP濃度顯著高于正常對照組。且ACS組較SAP組血清脂聯(lián)素更低，而hsCRP水平更高(p＜0.05)。ACS患者血清脂聯(lián)素與hsCRP呈顯著負相關(F=-0.6，p＜0.05)，與TIMI風險評分呈顯著負相關（r=-0.332，p＜0.05）。CAD患者危險因素越多，脂聯(lián)素水平越低。AMI患者中有前驅心絞痛癥狀者較無癥狀者降低，但