花生離體誘變及遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、Studie：／nvitroM]ttionandbtudlesonInutationand“t’m“ot_ienetlc上ranstOrmatloninPeanut(ArachishypogaeaL)，n●‘‘‘1hesissubmittedto@ngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceYuXinling(D

2、epartmentofLifeSciences)Supervisor：WangJingshanQingdaoChmaJune，2012青島農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文摘要摘要花生是重要的油料作物和經(jīng)濟作物，培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)專用多抗性花生新品種對提高花生產(chǎn)值增加農(nóng)民收益有著重要意義。但由于花生栽培種易感多種病害且遺傳基礎(chǔ)狹窄，常規(guī)雜交育種難以獲得突破性進展。本研究以花生胚小葉為外植體，以高能混合粒子場為誘變源，進行了花生離體誘變研究；同時對農(nóng)桿菌介導(dǎo)

3、的遺傳轉(zhuǎn)化條件進行了優(yōu)化，并以幾丁質(zhì)酶基因(CHsB)為目的基因進行了花生遺傳轉(zhuǎn)化研究，獲得了轉(zhuǎn)基因植株。本研究旨在為創(chuàng)造花生新種質(zhì)、拓寬花生遺傳基礎(chǔ)及開拓新的花生育種途徑奠定基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容如下：1采用不同劑量的高能混合粒子場(0、67、105、150和196Gy)輻照花生魯花11號的干種子，取其胚小葉外植體，先后置于添加10mg／L24D的MSB5誘導(dǎo)培養(yǎng)基和添加4mg／LBAP的MSB5培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，研究了輻照劑量對外植體存

4、活率、體胚誘導(dǎo)率和植株再生率的影響。結(jié)果表明：外植體存活率，除67Gy和對照無顯著差異外，其他隨著輻照劑量的增大而顯著下降；體胚誘導(dǎo)率，輻照劑量為67Gy時和對照無顯著差異，當輻照劑量分別增加至105Gy和150Gy時，其體胚誘導(dǎo)率顯著低于67Gy時的體胚誘導(dǎo)率，而二者之間無顯著差異，當輻照劑量再增加至196Gy時，未觀察到體胚的形成；植株再生率，除105Gy和150Gy劑量時無顯著差異外，其他隨著輻照劑量的增大而顯著下降。在輻照劑量為

5、105Gy時，外植體存活率、體胚誘導(dǎo)率和植株再生率均約為對照的一半，因此推斷105Gy可作為魯花11號適宜的誘變劑量。將獲得的再生苗經(jīng)嫁接、移栽于試驗田后獲得了莢果。2以花生花育22號胚小葉為外植體，利用GUS基因瞬時表達對農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化條件進行了優(yōu)化。農(nóng)桿菌菌株為GV3101，質(zhì)粒為雙元表達載體pCH581300，以HB作為抗性篩選標記，TDNA區(qū)有CHsB基因。試驗研究了不同侵染時間(5、10、15、20min)、共培養(yǎng)時間(

6、2、3、4、5d)和光照條件(光培養(yǎng)和暗培養(yǎng))，侵染液中添加MES(0、100、150、200、250mg／L)、煙草提取物(0、O25、O50、075、100ml／30m1)和AS(O、50、100、150、200I_tM)對遺傳轉(zhuǎn)化效果的影響，并且進行了潮霉素(HB)(O、10、15、20、25mg／L)和羧芐青霉素(Cb)濃度(0、100、300、500、700mg／L)的篩選。結(jié)果表明，侵染15min、在光照下共培養(yǎng)4d，侵染液