缺氧對脂肪細(xì)胞代謝及內(nèi)分泌功能的影響.pdf

1、目的：
　　肥胖的發(fā)生被認(rèn)為是一種慢性炎癥狀態(tài)，體內(nèi)脂肪細(xì)胞增生和肥大造成脂肪組織局部缺氧，而缺氧又與慢性炎癥有關(guān)。本實驗擬通過對培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞并將其誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞后，進(jìn)行缺氧處理（1％O2,5%CO2,94N2），檢測缺氧對脂肪細(xì)胞脂質(zhì)代謝及內(nèi)分泌功能的影響，初步探討缺氧對脂肪細(xì)胞脂質(zhì)代謝和內(nèi)分泌功能的調(diào)節(jié)機制，為肥胖發(fā)病機制的研究提供了新的方向和思路。
　　方法：
　　1．將3T3-L1前脂肪細(xì)

2、胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞(油紅O染色鑒定)。除對照組外，其余進(jìn)行缺氧處理（1%O2,5%CO2,94N2）,Real-TimePCR檢測缺氧處理后不同時間點激素敏感型脂肪酶（HSL）、脂肪酸合成酶（FASN）mRNA，WesternBlot檢測不同時間點磷酸化AMPK(pThr172-AMPK)、激素敏感型脂肪酶（HSL）、脂肪酸合成酶(FASN)、磷酸化Ser565激素敏感型脂肪酶(pSer565-HSL)蛋白表達(dá)水平。
　　2

3、．將3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞(油紅O染色鑒定)。分別收集正常組、缺氧組（缺氧處理24小時）培養(yǎng)液上清和細(xì)胞。分光光度法測定缺氧前后培養(yǎng)液上清中甘油、游離脂肪酸含量；裂解細(xì)胞，測定細(xì)胞內(nèi)ATP的含量。
　　3．將3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞(油紅O染色鑒定)。ELISA法檢測缺氧前后不同時間點IL-6、TNF-α和脂聯(lián)素的含量；分光光度法測定葡萄糖消耗量。
　　結(jié)果：
　　1、本研究通

4、過將3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)為脂肪細(xì)胞用于實驗，油紅O染色鑒定。3T3-L1是國際上公認(rèn)的研究脂肪細(xì)胞分化的細(xì)胞模型，實驗人員熟練掌握了誘導(dǎo)方法，可保證穩(wěn)定的細(xì)胞誘導(dǎo)成熟率。
　　2、缺氧處理脂肪細(xì)胞后，通過熒光實時定量PCR方法從mRNA水平檢測不同時間點HSL、FASN的表達(dá)情況，結(jié)果為:HSLmRNA相對量隨缺氧時間的延長無明顯變化；FASNmRNA相對量（除2h、4h外）隨缺氧時間的延長顯著降低。
　　3、與對照（

5、0h）相比，pThr172-AMPK在缺氧處理后，蛋白表達(dá)增加；HSL在缺氧前后無明顯變化,但磷酸化Ser565HSL、FASN蛋白隨缺氧時間的延長減弱(P<0.05)。
　　4、與正常相比，缺氧24h后，甘油(正常73.03±10.42μmol/L，缺氧204.47±38.93μmol/L)、游離脂肪酸（正常188.92±19.71μmol/L,缺氧530.43±87.42μmol/L）含量明顯升高，而細(xì)胞內(nèi)ATP含量明顯降低(

6、正常168.32±1.98μmol/gprot，缺氧50.11±9.40μmol/gprot)。
　　5、缺氧處理后（除4h外），葡萄糖消耗明顯增加。(P<0.05)
　　6、與正常相比，缺氧處理4h、8h、16h、24h后，培養(yǎng)液中IL-6含量明顯增加（P<0.05）,、TNF-α含量總體無明顯變化（P>0.05），而脂聯(lián)素水平則明顯被降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、缺氧使脂肪細(xì)胞脂解增加，F(xiàn)FA水