無(wú)創(chuàng)定量超聲積分與肝纖維化程度關(guān)系的實(shí)驗(yàn)及臨床研究.pdf

1、肝穿刺活體病理組織學(xué)檢查是診斷慢性肝病肝纖維化、肝硬化的金標(biāo)準(zhǔn)，但目前常規(guī)實(shí)施肝穿刺活體組織病理學(xué)檢查尚有相當(dāng)難度，超聲診斷技術(shù)作為一種簡(jiǎn)便快捷的無(wú)創(chuàng)性檢查手段，如能在慢性肝病肝纖維化階段的診斷中發(fā)揮作用，對(duì)于臨床治療及逆轉(zhuǎn)肝纖維化的療效觀察將具有積極的幫助。 目的: (1)本研究通過(guò)制作實(shí)驗(yàn)性肝纖維化動(dòng)物模型并搜集臨床肝纖維化患者，應(yīng)用多指標(biāo)超聲觀察，進(jìn)行半定量分析并計(jì)算每個(gè)實(shí)驗(yàn)鼠及肝纖維化患者每次超聲積分，探討肝纖維

2、化的超聲定量診斷作用。 (2)計(jì)算不同階段纖維化的肝循環(huán)指數(shù)(HCI)及A/P，評(píng)估肝儲(chǔ)備功能。 (3)分別進(jìn)行肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)檢查及外周血清常規(guī)生化肝功能檢查。 (4)在超聲引導(dǎo)下，對(duì)肝纖維化模型鼠及患者進(jìn)行肝組織組織病理學(xué)活檢。肝纖維化的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2000年西安會(huì)議標(biāo)準(zhǔn)。 (5)每份動(dòng)物實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采用免疫組化方法檢測(cè)細(xì)胞增殖相關(guān)因子細(xì)胞增殖核抗原PCNA及癌基因C-erbB-2的表達(dá)。

3、材料與方法: (1)肝纖維化模型制作：健康清潔級(jí)雄性SD大鼠(購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)35只，體質(zhì)量150--220g，平均180g，隨機(jī)分五組，一組為對(duì)照組(S0)，其余四組采用復(fù)合因子致肝纖維化模型方法，建立鼠肝纖維化模型。 (2)對(duì)肝纖維化動(dòng)物模型及肝纖維化患者進(jìn)行分別進(jìn)行二維超聲及彩色多普勒血流動(dòng)力學(xué)檢查，結(jié)果以磁光盤(pán)保存，脫機(jī)分析，對(duì)不同時(shí)期肝纖維化模型及肝纖維化患者進(jìn)行超聲積分及半定量分析。 (

4、3)通過(guò)彩色多普勒血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)，計(jì)算肝循環(huán)指數(shù)(HCI)及A/P。 (4)檢測(cè)對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組外周血清纖維化指標(biāo)水平和外周血清常規(guī)生化肝功能(總膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、血清白蛋白、血清球蛋白)。 (5)對(duì)實(shí)驗(yàn)鼠肝組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，觀察肝組織內(nèi)細(xì)胞增殖相關(guān)因子細(xì)胞增殖核抗原PCNA及癌基因C-erbB-2的表達(dá)。 結(jié)果: (1)肝實(shí)質(zhì)平均灰階值S0期與S1～4期間有顯著差異(P＜0.01)

5、，S1～4各組間有顯著差異(P＜0.01)。隨著纖維化程度加重，離散度S0期與S1-4期有顯著性差異，實(shí)驗(yàn)組間比較S1～4期間有顯著性差異(P＜0.01)。超聲檢查結(jié)果與肝纖維化分期的相關(guān)性分析表明，超聲總積分與病理分期相關(guān)系數(shù)為0.860(P＜0.01)；如采用超聲總積分與血清肝纖維化指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，可使早期肝硬化診斷靈敏性提高至96.5％，特異度提高至95.8％。 (2)隨著纖維化程度的加重HCI逐漸降低，A/P逐漸升高。

6、 (3)經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，超聲、CTP、MELD積分與肝纖維化病理分期相關(guān)系數(shù)為0.860，0.815，0.824，超聲、CTP、MELD積分診斷肝纖維化敏感度分別為94.5％，94.2％，93.9％，其特異度分別為93.4％，92.9％，93.8％。 (4)隨著纖維化程度加重，肝纖維化實(shí)驗(yàn)鼠及患者的血清肝纖維化指標(biāo)和生化指標(biāo)總膽紅素(TB)、白蛋白(ALB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)變化漸趨明顯。 (5)免疫組化染色結(jié)果表明

7、，對(duì)照組肝細(xì)胞核細(xì)胞增殖核抗原PCNA呈陰性表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組各期肝細(xì)胞核不同程度PCNA陽(yáng)性表達(dá)；對(duì)照組肝細(xì)胞膜癌基因C-erbB-2陰性表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組各期肝細(xì)胞膜不同程度細(xì)胞C-erbB-2陽(yáng)性表達(dá)，兩者表達(dá)率在S1-4期均有顯著性差異。 結(jié)論: (1)計(jì)算機(jī)輔助超聲圖像半定量分析，可對(duì)不同階段肝纖維化進(jìn)行量化。超聲總積分與病理分期相關(guān)性較好，相關(guān)系數(shù)為0.860;采用超聲總積分與血清肝纖維化指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，可使肝硬化診斷靈敏

8、度提高至96.5％，特異度提高至95.8％。超聲、CTP、MELD積分三種方法結(jié)合使用，診斷肝纖維化敏感度可提高至96.7％，特異度可提高至95.5％。 (2)HCI及A/P可反映肝纖維化時(shí)肝臟儲(chǔ)備功能。 (3)隨著纖維化程度加重，肝纖維化實(shí)驗(yàn)鼠和患者的血清肝纖維化指標(biāo)及血清生化指標(biāo)改變漸趨明顯。 (4)免疫組化染色顯示，肝纖維化患者肝細(xì)胞核PCNA及肝細(xì)胞膜C-erbB-2不同程度陽(yáng)性表達(dá)，表明在肝纖維化基礎(chǔ)上