RhoA-ROCK信號(hào)通路在白蛋白誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用及rHuEPO干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的:本文研究 RhoA/ROCK信號(hào)通路在一定濃度白蛋白誘導(dǎo)的人近端腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)轉(zhuǎn)分化中的作用及重組人紅細(xì)胞生成素(rHuEPO)干預(yù)效應(yīng),旨在探討尋找 rHuEPO腎臟保護(hù)效應(yīng)的可能作用機(jī)制。
　　方法:將體外孵育的 HK-2細(xì)胞隨機(jī)分為以下幾組:E1組(無任何刺激物)、E2組(加入20U/mL rHuEPO)、E3組(加入5mg/mL白蛋白)、E4組(5mg/mL白蛋白+5U/mL rHuEPO)、E5組(5m

2、g/mL白蛋白+10U/mL rHuEPO)、E6組(5mg/mL白蛋白+20U/mL rHuEPO)、E7組(加入10μmol/L Y2763230min后+5mg/mL白蛋白),各組均作用24 h。RT-PCR檢測各組細(xì)胞 RhoA、ROCK1 mRNA含量水平;免疫熒光檢測細(xì)胞α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、E-鈣黏蛋白( E-cadherin)的蛋白表達(dá); ELISA檢測細(xì)胞上清液中纖維連接蛋白( FN)的含量。
　　結(jié)

3、果:E1組和 E2組顯示 HK-2細(xì)胞呈現(xiàn)鵝卵石或者鋪路石樣形態(tài),給予5mg/mL白蛋白刺激后細(xì)胞表現(xiàn)出細(xì)長梭狀改變,呈現(xiàn)纖維細(xì)胞樣外觀;rHuEPO在5U/mL、10U/mL、20U/mL可以呈濃度依賴性阻止白蛋白誘導(dǎo)的 HK-2細(xì)胞纖維化,細(xì)胞向鵝卵石樣復(fù)轉(zhuǎn);在 E7組在鏡下觀察可見細(xì)胞形態(tài)呈橢圓形、細(xì)胞間隙稍增大,但細(xì)胞改變的程度較 E3組變小。RT-PCR結(jié)果表明 E3組 RhoA、ROCK1 mRNA表達(dá)較 E1組顯著升高(P

4、<0.05);E4組、E5組、E6組 RhoA、ROCK1 mRNA的表達(dá)顯著減少(P<0.05且組間差異 P均<0.05);與 E3組相比, E7組 RhoA mRNA表達(dá)無顯著差異(P>0.05),而 ROCK1 mRNA表達(dá)明顯下降(P<0.05)。細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示:E3組α-SMA蛋白表達(dá)與其他各組相比有顯著增高,而 E-cadherin表達(dá)則有明顯下降(P<0.05);E4組、E5組、E6組α-SMA蛋白表達(dá)逐漸下降,E-

5、cadherin表達(dá)逐漸增高(P<0.05且組間差異 P均<0.05),與 E3組比較,E7組α-SMA蛋白、E-cadherin表達(dá)有顯著差異(P<0.05)。ELISA結(jié)果顯示:E3組上清液 FN蛋白表達(dá)與其他各組相比有顯著增高(P<0.05),E4組、E5組、E6組 FN蛋白表達(dá)逐漸下降(P<0.05且組間差異 P均<0.05);與 E3組比較,E7組 FN蛋白水平亦存在顯著差異(P<0.05)。
　　結(jié)論:一定濃度的白蛋白