CyclinG1、G2蛋白表達與喉癌的相關性研究.pdf

1、喉鱗狀細胞癌簡稱喉癌(laryngeall squamous cell carcinoma，，LSCC)是我國北方地區(qū)高發(fā)的頭頸部惡性腫瘤。對細胞生長周期進行精確調(diào)控，維持細胞正常生長發(fā)育平衡是阻止喉癌發(fā)生、發(fā)展的有效途徑，也是成功治療喉癌的關鍵。細胞周期蛋白是真核細胞周期循環(huán)中主要的調(diào)節(jié)因子，在人類腫瘤細胞中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種細胞周期蛋白的異常表達。CyclinG是細胞周期蛋白家族中發(fā)現(xiàn)較晚的新成員，cyclinG1和cyclinG2在結(jié)

2、構(gòu)上具有高度同源性，但在功能上似乎各自發(fā)揮著特有的生物學功能。本實驗應用免疫組化(S-P)方法對52例原發(fā)性喉鱗狀細胞癌及其相鄰正常黏膜組織新鮮標本中cyclinG1、G2蛋白表達進行檢測，分析其與喉癌的組織病理分級、臨床分期以及解剖分型的關系，以探討cyclinG1、G2蛋白表達與喉癌的可能相關性。 材料與方法: 1、標本 52例喉癌標本均來自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院，經(jīng)病理切片確診。其相鄰正常黏膜組織(手術切

3、緣癌旁1.0cm外黏膜組織)作為對照組。所有患者術前均未行放療和化療，均無遠隔器官轉(zhuǎn)移。 2、免疫組化染色 免疫組化(S-P)法，以細胞核和/或胞漿呈棕黃色染色為陽性，隨機選取5個非重疊高倍視野，計算染色細胞百分比，陽性為染色細胞數(shù)≥5％，陰性為染色細胞數(shù)<5％。 3、統(tǒng)計學分析 所得數(shù)據(jù)應用Pearsonx<'2>檢驗進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果: 免疫組化染色結(jié)果：CyclinG1蛋白表達陽

4、性部位位于細胞核，而cyclinG2位于細胞漿中。喉癌及其相鄰正常黏膜組織中cyclinG1蛋白表達陽性百分比分別為82.69％(43/52)和30.77％(16/52)；cyclinG2分別為21.15％(11/52)和16.54％(32/52)。統(tǒng)計學處理結(jié)果提示cyclinG1蛋白在喉癌中表達增高，而cyclinG2蛋白表達降低。CyclinG1、cyclinG2蛋白在喉癌及其相鄰正常黏膜組織中表達差異均具有統(tǒng)計學意義(p<0.0

5、1)。 CyclinG1蛋白在高分化、中分化、低分化喉癌中表達陽性百分比分別為47.62％(10/21)、72.22％(13/18)和92.31％(12/13)；cyclinG2蛋白表達陽性百分比分別為42.86％(9/21)、22.22％(4/18),17.69％(1/13)。CyclinG1蛋白在I～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期喉癌中表達陽性百分比分別為65.00％(13/20)和93.75％(30/32)；cyclinG2蛋白表達陽性百

6、分比分別為40.00％(8/20)和9.38％(3/32)。CyclinGl蛋白表達增高和cyclinG2蛋白表達降低與喉癌的病理分級，臨床分期有關，組織分化程度越低，臨床分期越高，cyclinG1蛋白表達增高越明顯，而cyclinG2蛋白表達降低越明顯。差異均具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。 CyclinG1蛋白在聲門型、聲門上型喉癌中表達陽性百分比分別為82.14％(23/28)、83.33％(20/24)； cyclinG

7、2蛋白在聲門型、聲門上型喉癌中表達陽性百分比分別為21.43％(6/28)、20.83％(5/24)。經(jīng)統(tǒng)計學分析cyclinG1、G2蛋白表達與喉癌的解剖分型無相關性(p>0.05)。 討論: CyclinG1基因由Tamura等于1993年發(fā)現(xiàn)，定位于5q32-34，第一個內(nèi)含子中有p53蛋白結(jié)合位點。Cyclin G1蛋白主要定位于細胞核，在骨胳肌中表達水平最高，其次在卵巢、腎臟和結(jié)腸組織中也有較高水平的表達。但c

8、yclinG1并非為細胞增殖負性調(diào)節(jié)因子。在部分骨肉瘤中cyclin G1呈高表達，cyclin G1反義RNA表達減緩骨肉瘤細胞增殖，有促進細胞增長作用。此外，Smith等將cyclin G1 cDNA導入人大腸癌細胞和正常人成纖維細胞，發(fā)現(xiàn)cyclin G1表達促進細胞增殖。 本實驗結(jié)果顯示cyclinG1蛋白在喉癌組織中表達較其相鄰正常黏膜組織中表達增高，差異具有統(tǒng)計學意義。研究發(fā)現(xiàn)cyclinG1的持續(xù)性高水平表達，對p

9、53的轉(zhuǎn)錄活性反應遲鈍。過多的cyclinG1通過與PP2A結(jié)合使MDM2去磷酸化，促進MDM2介導的p53泛素化，加速p53的降解，從而表現(xiàn)為對p53的負反饋作用，抑制細胞的凋亡，導致腫瘤細胞無限制增長。CyclinG1蛋白的改變可能與喉癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關。應用順鉑、阿霉素等藥物處理細胞后發(fā)現(xiàn)G2/M期阻滯的細胞比例與cyclinG1的表達明顯正相關，推測cyclinG1可能與細胞周期G2/M檢查點調(diào)控有關。 Home等首先報道了

10、cyclin G2基因克隆，其蛋白主要定位在細胞質(zhì)中。Bates等的研究表明cyclin G1和cyclin G2的mRNA表達都能被DNA損傷藥物放線菌素D誘導，不同的是對cyclin G2的誘導表達呈p53非依賴性。當B細胞的增殖受抑制或發(fā)生細胞周期阻抑時，cyclin G2轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。Wykoff等將抑癌基因VHL重新導入已存在該基因缺陷的腎癌細胞，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因誘導表達的一系列靶基因中包括cyclin G2。Kim Y等在人口腔癌

11、中檢測到cyclin G2基因表達的減低。劉潔等應用腺病毒載體轉(zhuǎn)染胃腺癌細胞系SGC-7901，cyclin G2基因有抑制其增殖的作用。本研究中cyclin G2蛋白在喉癌組織中表達較其相鄰正常黏膜組織中表達降低，與上述研究結(jié)果一致，均表明cyclin G2可能是細胞周期的負性調(diào)控因子。喉癌中cyclin G2蛋白表達降低提示其可能與喉癌的發(fā)生、發(fā)展機制相關。 結(jié)論: 1、喉癌中cyclin G1蛋白表達增高，cycl