卵巢癌轉移相關N-糖鏈的發(fā)現(xiàn)及其在轉移中的功能研究.pdf

1、卵巢癌是致死率最高的婦科惡性腫瘤，且發(fā)病率在世界范圍內呈上升趨勢。由于卵巢癌具有起病隱匿，早期缺乏典型臨床癥狀等特點，大多數(shù)患者確診時已為疾病晚期，此時已經(jīng)發(fā)生了大面積的轉移。發(fā)生了遠處轉移的卵巢癌，其治療效果差，死亡率高，5年生存率低于30％。轉移是卵巢癌重要的生物學特性，是導致卵巢癌患者死亡的主要原因。因此，尋找與卵巢癌轉移相關的生物標志物在卵巢癌發(fā)生轉移的早期進行診斷是必要而迫切的。
　　蛋白質糖基化是最常見和最重要的翻譯后

2、修飾之一。糖基化修飾的異常，包括糖蛋白量的異常變化和/或其糖鏈結構的異常改變，與諸多病理過程密切相關。大量研究表明，腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中往往伴隨著糖基化修飾的異常。這些異常的糖鏈結構是惡性腫瘤的普遍特征，其中有些異常變化的糖鏈參與其惡性生物學行為的形成，促進轉移并成為有用的腫瘤進程監(jiān)測生物標志物。因而，腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中異常變化的糖鏈為新的生物標志物的發(fā)現(xiàn)提供了可靠的來源。目前，也有研究表明糖基化修飾在卵巢癌轉移過程中起著非常重要的作用

3、。例如，間皮素-MUC16結合促進卵巢癌腹腔轉移，但是這一過程依賴于其表面的N-糖鏈。通過去除卵巢癌腫瘤細胞表面糖鏈的方式能夠改變細胞粘附透明質酸的能力。這些研究表明，糖鏈在卵巢癌的轉移過程中發(fā)揮著重要的作用，然而，N-糖鏈在卵巢癌轉移過程中的準確變化以及特定類型的N-糖鏈在卵巢癌轉移中的作用尚不清楚。據(jù)報道，腫瘤細胞分泌上清中特異性改變的糖鏈有望成為腫瘤無創(chuàng)性診斷的生物標志物。準確而可靠地獲取這些糖鏈的結構以及量的信息有助于腫瘤診斷標

4、志物的發(fā)現(xiàn)。定量糖組學為其提供了有效而可靠的手段，不僅能區(qū)分樣品中結構不同的糖鏈，還能揭示各種糖鏈豐度的不同。
　　本研究中，我們發(fā)展了適用于細胞上清的穩(wěn)定同位素代謝標記定量糖組學的方法，并首次將其應用到漿液性卵巢癌細胞株SKOV3及其高轉移株SKOV3-ip分泌上清N-糖鏈的定量研究。結果顯示，通過該方法我們首次揭示了漿液性卵巢癌細胞分泌上清中18種N-糖鏈的結構和定量信息，發(fā)現(xiàn)其中17種N-糖鏈的表達水平存在差異。有意思的是，

5、與低轉移的漿液性卵巢癌細胞株SKOV3相比，平分型N-糖鏈(bisecting GlcNAc)的表達水平在高轉移的漿液性卵巢癌細胞SKOV3-ip中顯著降低，而β-1，6分支的N-糖鏈的表達水平則顯著升高。隨后，我們利用了綜合的分子生物學手段，包括凝集素印跡，實時熒光定量PCR，蛋白質印跡，免疫組化，細胞遷移實驗以及細胞侵襲實驗在糖基轉移酶水平上對這兩種糖鏈的改變進行了驗證，并對其在卵巢癌轉移中的功能進行了研究。我們的實驗數(shù)據(jù)顯示，MG

6、AT3及其催化產物平分型N-糖鏈(bisecting GlcNAc)在漿液性卵巢癌細胞的遷移與侵襲中起抑制作用，而MGAT5及其催化產物β-1，6分支的N-糖鏈在漿液性卵巢癌細胞的遷移和侵襲過程中起促進作用。此外，我們還證明了這兩種N-糖鏈在卵巢癌細胞中是陰陽的關系。實驗證明，穩(wěn)定同位素代謝標記的定量糖組學與分子生物學技術相結合的綜合策略為尋找卵巢癌轉移過程中特異性改變的糖鏈提供了可靠的方法。本研究首次全面揭示了卵巢癌細胞分泌上清中轉移