同種異體骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)急性心肌梗死的治療效應(yīng)及其機(jī)制.pdf

1、目的：細(xì)胞移植指通過(guò)將合適的供體細(xì)胞移植到病變心肌，通過(guò)獨(dú)特的機(jī)制增加有功能的心肌細(xì)胞的數(shù)量并刺激毛細(xì)血管的生成以改善心肌血供，以期達(dá)到改善心功能的目的，是治療缺血性心臟病的新的有效方法，已成為研究熱點(diǎn)。骨髓基質(zhì)細(xì)胞(Bonemarrowstromalcells，BMSCs)具有向肌細(xì)胞分化的潛能，是目前用于治療缺血性心臟病最有前途的細(xì)胞之一。但隨著年齡的增長(zhǎng)，BMSCs的數(shù)量和增殖分化能力都較青年時(shí)期明顯下降。該問(wèn)題限制了自體BMSC

2、s移植在臨床上的應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)在大鼠心肌梗死后，采用經(jīng)心肌注射的方法，移植同種異體BMSCs，觀察移植細(xì)胞在體外能否誘導(dǎo)同種異體大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)的增殖反應(yīng)；在體內(nèi)能否存活及進(jìn)一步增殖分化；對(duì)受體心臟產(chǎn)生的影響及其作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用尋找理論依據(jù)。 方法：1.結(jié)扎大鼠冠脈左前降支制作急性心肌梗死模型，分離、培養(yǎng)BMSCs。體外實(shí)驗(yàn)：建立BMSCs+同種

3、異體心肌梗死大鼠PBMCs以及BMSCs+同種異體PBMCs+PBMCs的混合培養(yǎng)體系，研究BMSCs能否刺激PBMCs的增殖反應(yīng)，及其對(duì)PBMCs被刺激后產(chǎn)生的增殖反應(yīng)的影響。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：將心肌梗死大鼠模型隨機(jī)分為2組。4周后，取傳兩代的體外培養(yǎng)的同種異體大鼠BMSCs，注射到大鼠心肌梗死區(qū)，為移植組。對(duì)照組僅接受培養(yǎng)基注射。移植4周后檢測(cè)受體心臟的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，然后取標(biāo)本，檢測(cè)移植細(xì)胞存活、分化和組織的血管新生狀況。2.在心肌梗死及

4、細(xì)胞移植治療后的不同時(shí)期取標(biāo)本動(dòng)態(tài)觀察缺血心肌組織VEGF、bFGF的表達(dá)和血管新生狀況。3.將BMSCs在缺氧條件下培養(yǎng)24h后移植為缺氧移植組，比較缺氧培養(yǎng)后BMSCs胞內(nèi)VEGF和Ⅷ因子表達(dá)的變化、以及該細(xì)胞對(duì)缺血心肌VEGF的表達(dá)和血管新生狀況的影響。 結(jié)果：1.同種異體BMSCs在體外未能刺激PBMCs的增殖反應(yīng)，且對(duì)PBMCs被第三方抗原刺激的增殖反應(yīng)有抑制作用；移植組大鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)較對(duì)照組明顯改善；同種異體

5、BMSCs移植入心肌梗死區(qū)后能夠度過(guò)急性炎癥期而且不引起明顯移植排斥反應(yīng)；位于梗死區(qū)的移植細(xì)胞主要分化為成纖維細(xì)胞，部分位于心肌梗死區(qū)周?chē)募?xì)胞分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞；移植組缺血心肌新生血管數(shù)目較對(duì)照組明顯增加(14±4.7/HPFVS6±2.4/HPFP＜0.05)。2.心肌梗死后，缺血心肌組織VEGF和bFGF的表達(dá)在梗死后7d達(dá)高峰，28d開(kāi)始下降，第42和56d時(shí)表達(dá)明顯下降。而細(xì)胞移植組二者的表達(dá)在心肌梗死后第42d和56d明顯高

6、于對(duì)照組。3.體外培養(yǎng)的BMSCs經(jīng)缺氧預(yù)處理后胞漿內(nèi)VEGF蛋白、mRNA和Ⅷ因子蛋白的表達(dá)(0.17±0.025VS0.29±0.019，P＜0.01)明顯增加。缺氧移植組和移植組梗死區(qū)VEGF的表達(dá)和毛細(xì)血管密度較對(duì)照組明顯增加。缺氧移植組VEGF的表達(dá)和毛細(xì)血管密度又較移植組明顯增加。 結(jié)論：1.同種異體BMSCs具有極低的免疫原性，移植后可促進(jìn)心肌梗死后血管新生、改善心功能，是用于心肌移植可供選擇的種子細(xì)胞；2.BMS