辣椒組培再生體系和花培體系的建立及其應(yīng)用研究.pdf

1、辣椒(Capsicum annuum L．)是一種十分重要的蔬菜和工業(yè)原料作物，富含維生素C及辣椒素等多種活性物質(zhì)，對(duì)人體具有重要保健作用。辣椒高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)取決于優(yōu)良品種的應(yīng)用與推廣，而現(xiàn)代生物技術(shù)為辣椒的遺傳改良提供了契機(jī)。本論文研究建立了辣椒離體培養(yǎng)再生體系和花培體系，并利用離體再生體系開展了辣椒農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化應(yīng)用研究。主要結(jié)果如下： 1.選擇儲(chǔ)藏期一年以內(nèi)的辣椒種子培養(yǎng)辣椒外植體，能夠有效提高辣椒組織培養(yǎng)的效率。

2、 2.12-16d的苗齡辣椒無菌苗的子葉是組織培養(yǎng)的最佳外植體。 3.建立以辣椒子葉為外植體的叢生芽直接誘導(dǎo)體系，在分化培養(yǎng)基中，添加BA和IAA有利于叢生芽的誘導(dǎo)，但濃度高于5mg/L的BA不利于叢生芽的伸長。添加4mg/LAgNO<,3>有利于辣椒的分化。在本研究中最適合的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA5.0mg/L+IAA0．1 mg。Ld+AgNO<,3> 4mg/L。 4.不同的基因型辣椒子葉和下胚軸的叢生芽的誘導(dǎo)

3、率有顯著的差異。 5.1mg/L的GA<,3>對(duì)辣椒叢生芽的伸長有促進(jìn)作用，高于此濃度則容易產(chǎn)生畸形芽，且不容易扭轉(zhuǎn)。 6.篩選出辣椒生根培養(yǎng)基的最佳配方為：1/2 Ms+NM 0.1mg/L+IBA0.5mg/L。 7.辣椒遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn)表明，500mg/L的羧芐青霉素能達(dá)到抑制農(nóng)桿菌生長的目的，辣椒的潮霉素致死濃度可以達(dá)到80mg/L。 8.辣椒子葉遺傳轉(zhuǎn)化的最佳條件：辣椒子葉必須預(yù)培養(yǎng)6 d左右，用O

4、D<,600>值約為0.6的菌液濃度浸泡，浸泡時(shí)間約為7min，共培養(yǎng)3～4 d后進(jìn)行洗菌，篩選培養(yǎng)辣椒的不同基因型花藥培養(yǎng)條件有顯著差異。 9.藥發(fā)育時(shí)期和生長狀況是影響花藥培養(yǎng)的成敗2個(gè)重要因素，應(yīng)選擇富有活力、單核靠邊期的花藥進(jìn)行辣椒花藥培養(yǎng)。 10.低溫預(yù)處理會(huì)造成花藥大量褐化死亡，誘導(dǎo)效果不如高溫處理和常溫培養(yǎng)。 11.花藥培養(yǎng)中激素濃度配比和正常外植體分化培養(yǎng)有很大區(qū)別，我們篩選出的最佳誘導(dǎo)配方為：M