遺傳性腦海綿狀血管瘤家系永生細胞株的建立與保存.pdf

1、目前，利用EB病毒(Epstein-Barrvirus，EBV)轉化外周血B-淋巴細胞建立遺傳性疾病或其他罕見疾病永生細胞庫已成為永久保存疾病個體遺傳資源的首選方法。該方法可為遺傳性疾病或其他罕見疾病的遺傳流行病學、臨床遺傳學、分子生物學等研究提供永久性實驗材料，為后續(xù)研究奠定實驗基礎。 腦海綿狀血管瘤(CerebralCavernousMalformations，CCM)是一種常見的多發(fā)病，臨床上可分為家族性遺傳和散發(fā)性病例兩

2、大類，病灶多位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的各個部位，伴有經(jīng)常性出血等癥狀。家族性腦海綿狀血管瘤以常染色體顯性方式遺傳，該病發(fā)病率高，病因復雜，對它的研究已經(jīng)成為醫(yī)學和分子遺傳學研究領域的熱點之一。 本研究即利用EBV轉化技術，成功建立了一個CCM遺傳家系的永生細胞株，完整的保留了該疾病的遺傳資源，并為今后進一步研究該病的發(fā)病機制和建立治療方案奠定了堅實的基礎。具體研究內容如下： 1.比較了利用EBV建立永生細胞株的環(huán)胞霉素A(CyA

3、)處理法、微量全血法和凍存全血法在建株成功率和所需時間長短方面的差異，最終選擇并確定了建株成功率高、所用時間較短的EBV加CyA處理法作為建立永生細胞株的最佳方法。 2.在常規(guī)染色體G顯帶技術的基礎上，通過對影響分裂相數(shù)目、染色體長度、分散程度和帶紋顯示的相關條件進行了實驗，確定了針對永生細胞染色體G顯帶的最佳條件：PHA終濃度為0.1mg/mL，作用時間為48h，秋水仙素終濃度為0.04μg/mL，從而為人永生淋巴細胞株的鑒定